為了檢測奶牛乳腺炎無乳鏈球菌GapC1-150抗原相關(guān)疫苗免疫血清抗體,我們用重組蛋白GapC1-150作為包被抗原建立了間接ELISA牛血清抗體檢測方法。通過方陣法確定包被抗原濃度和血清稀釋度;通過對陰性牛血清和免疫牛血清的OD450值檢測分析確定cut-off值;通過與多種抗原免疫血清和病原感染血清進行檢測確定該方法具有良好的特異性;通過對陽性和陰性血清倍比稀釋檢測確定該檢測方法靈敏性較好,并對臨床收集的牛血清樣本進行了檢測。以上結(jié)果表明,所建立的間接ELISA檢測方法可用于GapC1-150抗原相關(guān)疫苗免疫血清抗體檢測。 

【文章來源】：黑龍江八一農(nóng)墾大學學報. 2020,32(06)

【文章頁數(shù)】：7 頁

【部分圖文】：

ELISA的cut-off值確定

用方陣法以不同濃度的包被抗原與不同稀釋度的陰、陽血清做間接ELISA，測定OD450值，求P/N值。當抗原包被濃度為2.5μg·m L-1、血清稀釋1/1 000時，P/N值最大。結(jié)果詳見表1。2.3 間接ELISA反應(yīng)條件優(yōu)化

用建立的ELISA檢測方法分別對重組e Gap C1-150、GIT、Isd B、Trap、p ET32a、金葡菌Wood46、無乳鏈球菌HLJ57、大腸桿菌腹瀉牛血清、牛副結(jié)核陽性血清、牛布氏桿菌陽性血清進行檢測。結(jié)果顯示，g Gap C1-150作為包被抗原所建立的間接ELISA檢測方法，檢測到e Gap C1-150蛋白免疫血清、GIT免疫血清陽性，其他血清均呈陰性，說明與其他血清無交叉反應(yīng)。結(jié)果詳見圖4。圖3 ELISA的cut-off值確定

【參考文獻】：
期刊論文
[1]奶牛乳房炎病原菌診斷技術(shù)研究進展[J]. 王丹,楊峰,李新圃,羅金印,劉龍海,張哲,張亞茹,張莉莉,李宏勝.  中國畜牧獸醫(yī). 2017(06)
[2]奶牛乳房炎疫苗研究進展[J]. 劉龍海,李新圃,楊峰,羅金印,王旭榮,張哲,羅增輝,李宏勝.  動物醫(yī)學進展. 2016(01)
[3]奶牛乳房炎的危害及其預(yù)防措施[J]. 陳永耀,楊雪峰.  河南科技學院學報(自然科學版). 2010(04)
[4]蕪湖地區(qū)豬“高熱病”血清流行病學分析[J]. 季慕寅.  安徽科技學院學報. 2010(06)
[5]間接ELISA檢測奶牛乳房炎疫苗保護效果方法的建立[J]. 張捷,楊曦亮.  中國奶牛. 2009(11)
[6]間接ELISA檢測奶牛乳房炎多聯(lián)苗抗體方法的研究[J]. 馮萬新,李宏勝,羅金印,李新圃,徐繼英,田海燕,李曉明.  中獸醫(yī)醫(yī)藥雜志. 2008(04)

碩士論文
[1]乳房鏈球菌GapC蛋白的表達及免疫保護研究[D]. 夏春雷.黑龍江八一農(nóng)墾大學 2008



本文編號：3413231