豬瘟是由豬瘟病毒（CSFV）引起的一種嚴(yán)重危害養(yǎng)豬業(yè)的烈性動(dòng)物傳染病。天然免疫系統(tǒng)是機(jī)體抵抗病毒感染的第一道防線,其中干擾素（IFN）和干擾素刺激基因（ISGs）在宿主抗病毒防御過程中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。豬瘟病毒（CSFV）感染宿主后,激活I(lǐng)型IFN信號(hào)通路,誘導(dǎo)其下游的ISGs轉(zhuǎn)錄表達(dá),進(jìn)而發(fā)揮抗CSFV作用。實(shí)驗(yàn)室前期實(shí)驗(yàn)篩選到豬源2’-5’寡腺苷酸合成酶樣蛋白（pOASL）為潛在的抗CSFV ISG分子,但其抗病毒分子機(jī)制尚不清楚。本研究旨在證實(shí)pOASL的抗CSFV活性,并解析其抑制CSFV復(fù)制的分子機(jī)制。我們構(gòu)建了過表達(dá)pOASL的PK-15細(xì)胞系（PK-pOASL）和對(duì)照細(xì)胞系PK-EGFP,將CSFVShimen株感染過表達(dá)細(xì)胞系,從CSFV滴度、基因組拷貝數(shù)及非結(jié)構(gòu)蛋白Npro表達(dá)水平三個(gè)方面評(píng)價(jià)CSFV的復(fù)制水平,結(jié)果表明過表達(dá)pOASL抑制CSFV復(fù)制;相反,利用siRNA下調(diào)PK-15細(xì)胞中的內(nèi)源性O(shè)ASL蛋白后,感染rCSFV-Fluc或CSFV-SM株,證實(shí)下調(diào)內(nèi)源性O(shè)ASL促進(jìn)CSFV復(fù)制。過表達(dá)及下調(diào)pOASL試驗(yàn)均證實(shí)pOASL是一種抗CSFV ISG分子。... 

【文章來源】：中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京市

【文章頁數(shù)】：53 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

干擾索信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路(改編自Scttneideretal.,2014)

２００９）。人源ＯＡＳＬ?（ｈＯＡＳＬ）發(fā)揮抗病毒作用依賴于其Ｃ末端泛素樣區(qū)域（與泛??素同源），而不依賴ＲＮａｓｅＬ系統(tǒng)。ｈＯＡＳＬ利用其泛素樣區(qū)域與ＲＩＧ－Ｉ相互作用，??進(jìn)而激活Ｉ型ＩＦＮ信號(hào)發(fā)揮抗病毒效應(yīng)（圖３）。例如，ｈＯＡＳＬ能夠抑制腦心肌炎??病毒（ＥＭＣＶ）的復(fù)制（Ｍａｒｑｕｅｓｅｔａｌ．，２００８）。然而豬源?ＯＡＳＬ?（ｐＯＡＳＬ）基因存??在一個(gè)提前終止密碼子，表達(dá)缺少Ｃ末端泛素樣區(qū)域的截短型ＯＡＳＬ蛋白。???ｍ???ｒ??ｎ－??＾?＾?＆?｜?ＲＩＧ－Ｉ?ｉｎａｃｔｉｖｅ??．，?ＲＮａｓｅ?Ｌ??ｉｎａｃｔｉｖｅ?１ＭＤＡ５?ＲＩＣ－Ｉ?ｈＯＡＳＬ??ＡＴＰ?２’－５’??ＲＮａＳｅ?Ｌ?Ｃ?ｌｅｗｅｄ??ｄｓＫＮＡ??ａｃｌｉ＇ｃ?．?ｉ??＾?ＩＲＦ７?ＩＲＦ３??Ｊｎ０ＡＳＬ，?Ｊ?１ＲＦ７??ＩＲＦ７ｍＫＮＡ?Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ??一匕￣；?「＂、??＞－Ｐ，ＲＦ７?．ＲＦ７?，ＫＫ３?）??ｌ，Ｙ＇?，Ｖ、?，Ｙ、??＾?＾?ｗ??ｙ?ｙ?、人?乂?、人?＞／?ｖ?ｖ??圖３?ＯＡＳ家族蛋白抗病毒通路（改編自Ｃｈｏｉ?ｅｔａｌ．

Ｆｉｇ．?４?Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ?ｏｆ?ｔｈｅ?ａｎｔｉ－ＣＳＦＶ?ＩＳＧｓ．?（Ｌｉ?ｅｔ?ａｌ．，?２０１６）??１．３研宄目的及意義??豬瘟嚴(yán)重危害我國(guó)養(yǎng)豬業(yè)，目前對(duì)豬瘟的防控以接種疫苗為主。先天免疫是宿??主防御病毒入侵的第一道防線，ＩＳＧｓ是［ＦＮ誘導(dǎo)宿主產(chǎn)生的發(fā)揮抗病毒作用的效應(yīng)??分子，因此，研究宿主ＩＳＧｓ分子抗豬瘟病毒機(jī)制具有重要的現(xiàn)實(shí)意義和應(yīng)用價(jià)值。??在前期篩選抗ＣＳＦＶ特異性ＩＳＧｓ分子研宄中，發(fā)現(xiàn)ｐＯＡＳＬ為潛在的抗ＣＳＦＶ??ＩＳＧｓ分子（Ｌｉｅｔａｌ．，２０１６）。本研究旨在鑒定ｐＯＡＳＬ的抗ＣＳＦＶ活性，并深入解??析ｐＯＡＳＬ抗ＣＳＦＶ的分子機(jī)制，為抗ＣＳＦＶ制劑的研發(fā)提供可能，為黃病毒科其??他成員的抗病毒ＩＳＧｓ研究提供參考。此外，闡明ｐＯＡＳＬ的抗病毒機(jī)制，為豐富不??同物種ＯＡＳＬ的抗病毒機(jī)制提供參考，因此，本研究既具有突出的科學(xué)意義，又具??有潛在的應(yīng)用價(jià)值。??


本文編號(hào)：3408849