益生菌和中藥提取物對機體均有良好的保健作用,能否保持各自的優(yōu)點聯(lián)合應用,對藥品研發(fā)具有深遠的指導意義。本研究通過對比試驗選擇適合的益生菌,采用檢測表型特征的常規(guī)方法結合現(xiàn)代分子生物學PCR方法鑒定益生菌,用溶血性實驗及小鼠致病性實驗評價益生菌的安全性,根據(jù)多糖含量變化、細菌生長曲線與活菌數(shù)計數(shù)方法觀察益生菌與中藥提取物共培養(yǎng)的相互影響,采用抑菌試驗研究益生菌與中藥提取物共培養(yǎng)對致病菌的作用,試驗結果如下:試驗一、3種益生菌的對比篩選試驗。將益生菌（30億cfu/mL）按0.1mL/10g小鼠體重進行灌胃。結果,各試驗組的小鼠脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù)差異不顯著（P>0.05）�；旌暇M鼠在試驗第7天增重率為0.72±0.04g/d增重顯著高于對照組（P<0.05）,第14天丁酸梭菌組的增重率為1.57±0.05g/天增重顯著高于對照組（P≤0.05）。在植物乳桿菌組和混合菌組三個階段內(nèi)均出現(xiàn)小鼠剖檢異常。試驗二、LYD芽孢桿菌的鑒定與抵抗力試驗。采用傳統(tǒng)方法及分子生物學方法鑒定LYD芽孢桿菌為地衣芽孢桿菌。11種防腐消毒藥耐受力試驗,結果2%氫氧化鈉、3%雙氧水對地衣芽孢桿菌有殺滅... 

【文章來源】：廣西大學廣西壯族自治區(qū) 211工程院校

【文章頁數(shù)】：59 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖３－１?ＬＹＤ芽孢桿菌菌落?

３．２．４結果與分析??３．２．４．１形態(tài)學鑒定??ＬＹＤ芽孢桿菌菌株在營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基培養(yǎng)１２ｈ后，形態(tài)如圖３－１，３－２所示，菌落??呈白色、扁平、表面粗糙褶皺、邊緣不整齊的地衣狀。挑取菌落進行革蘭氏染色，如??圖所示，菌體為藍紫色、桿狀、單個或成對、短鏈、革蘭氏陽性桿菌。??．Ｗ?二．??圖３－１?ＬＹＤ芽孢桿菌菌落?圖３－２?ＬＹＤ芽孢桿菌革蘭氏染色??Ｆｉｇ．?３－１?ＬＹＤ?ｂａｃｉｌｌｕｓ?ｓｕｂｔｉｌｉｓ．?Ｆｉｇ．?３－２?ＬＹＤ?Ｂａｃｉｌｌｕｓ?ｇｒａｍｍｅ?ｓｔａｉｎ．??３．２．４．２生理生化鑒定??ＬＹＤ芽孢桿菌的生理生化試驗和對不同碳源的發(fā)酵利用情況試驗結果如圖３－３、??３￣４、３－５和表３－１所示，對照《伯杰氏細菌鑒定手冊》進行判斷，鑒定結果為地衣芽??孢桿菌屬。??表３－１?ＬＹＤ芽孢桿菌的生化試驗??Ｔａｂｌｅ?３－１?ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ?ｔｅｓｔ?ｏｆ?Ｂａｃｉｌｌｕｓ?ＬＹＤ???項目名稱?＾???厭氧生長?＋??Ｖ－Ｐ測定?＋??淀粉水解試驗?＋??明膠液化試驗?＋??Ｄ－甘露醇?＋??枸櫞酸?＋???一內(nèi)酸鹽?＋???注：＋表示陽性結果，－表示陰性結果??２０??

畚牡匾卵浚嘲?司??現(xiàn)忻縑崛∥鎘τ玫某醪窖芯浚崳?＃．?ｒｉ?場??圖３－３?ＬＹＤ芽孢桿菌菌落?圖３－４?ＬＹＤ芽孢桿菌淀粉水解圖３－５?ＬＹＤ芽孢桿菌生化鑒定??ＦＩＧ３－３?ＬＹＤ?ｂａｃｉｌｌｕｓ?ｓｕｂｔｉｌｉｓ．?試驗?ＦＩＧ３－５?ＬＹＤ?Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ??ＦＩＧ?３－４?．ＬＹＤ?ｔｅｓｔ?ｏｆ?ｓｔａｒｃｈ?ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｏｆ?Ｂａｃｉｌｌｕｓ??ｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓ?ｏｆ?Ｂａｃｉｌｌｕｓ??３．２．４．２?１６Ｓ?ｒＤＮＡ基因序列同源性分析??以地衣芽孢桿菌的ＤＮＡ為模板，１６Ｓ?ｒＤＮＡ通用引物進行擴增后得到約ｌＯＯＯｂｐ??的特異性擴增產(chǎn)物如圖所示，產(chǎn)物送康維生物科技有限公司測序。??將地衣芽孢桿菌的１６Ｓ?ｒＤＮＡ的ＰＣＲ克隆進行測序，獲得長度為１０１５ｂｐ的１６Ｓ??ｒＤＮＡ序列，和ＰＣＲ電泳結果一致如圖３－８。測序結果見附錄１。??將測序結果在ＮＣＢＩ數(shù)據(jù)庫與其他細菌進行１６ＳｒＤＮＡ序列進行對比，找出同源性??較高的３株菌株，ＭｅｇＡｌｉｇｎ構建矩形圖和系統(tǒng)進化樹，如圖３－６、３－７。經(jīng)同源性對比，??試驗菌株于地衣芽孢桿菌同源性達９７．８％，屬于芽孢桿菌屬地衣芽孢桿菌種。???Ｐｅｒｃｅｎｔ?Ｉｄｅｎｔｉｔｙ???Ｍ?１?Ｉ?２?Ｉ?３?Ｉ?４????Ｉ〇＞?１?ｍ?９７．８?９７．８?９７．６?１?ＮＲ＿Ｂａｄｌｌｕｓ??｜?＇?ＨＵ?ｌｌｌｌ丨丨丨丨丨?Ｉ?２?ＮＲ＿１１８９９６．１??｜?３?２．２?０．０?ｌ?３?ＮＲ＿１１６０２３．１??〇?４?


本文編號：3403244