毛發(fā)是由皮膚演變而來的皮膚附屬物,一般哺乳動(dòng)物的毛發(fā)要經(jīng)過毛囊的發(fā)育和分化過程,這個(gè)過程與很多功能基因、生長因子有關(guān)。通過轉(zhuǎn)基因技術(shù),已經(jīng)能夠成功地把外源基因轉(zhuǎn)到哺乳動(dòng)物細(xì)胞內(nèi),促進(jìn)其毛發(fā)的生長,獲得高產(chǎn)優(yōu)質(zhì)的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物。同時(shí),我們也必須解決轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品的安全性。所以,怎樣去除外源基因附屬攜帶的標(biāo)記元件是解決這個(gè)問題的關(guān)鍵。本研究應(yīng)用了Cre-LoxP重組酶系統(tǒng)的特異敲除功能,對構(gòu)建好pKH-L載體中的HIF-1α基因,進(jìn)行條件選擇性的刪除,因此轉(zhuǎn)基因技術(shù)產(chǎn)物的安全性得到了很大的提高。也為轉(zhuǎn)基因內(nèi)蒙古絨山羊的培育提供了真核表達(dá)載體。首先以內(nèi)蒙古白絨山羊胎兒成纖維細(xì)胞cDNA為模板,PCR克隆HIF-1α基因,測序正確后,以pKT-L載體為基礎(chǔ),pMD19T為中間載體,構(gòu)建pKH-L真核表達(dá)載體（功能元件順序K14-HIF-1α-PolyA-LoxP-CDsRed-LoxP）,轉(zhuǎn)染成纖維細(xì)胞和皮膚成纖維細(xì)胞用脂質(zhì)體介導(dǎo)法,后經(jīng)熒光檢測轉(zhuǎn)染效率均達(dá)到65%。測定HIF-1α基因的mRNA在兩種成纖維細(xì)胞中的表達(dá)程度用熒光定量PCR的方法,結(jié)果顯示HIF-1α基因在轉(zhuǎn)染pKH-L的皮膚成纖維細(xì)... 

【文章來源】：內(nèi)蒙古大學(xué)內(nèi)蒙古自治區(qū) 211工程院校

【文章頁數(shù)】：54 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRUCT
縮略詞表
引言
    參考文獻(xiàn)
第一章 HIF-1α基因的克隆
    1 材料與方法
    2 結(jié)果與分析
    3 討論
第二章 基于Cre/LoxP系統(tǒng)的皮膚特異性表達(dá)HIF-1α因真核表達(dá)載體的構(gòu)建
    1 材料與方法
    2 結(jié)果與分析
    3 討論
    參考文獻(xiàn)
第三章 真核表達(dá)載體pKH-L轉(zhuǎn)染細(xì)胞及HIF-1α基因的表達(dá)檢測
    1 材料與方法
    2 結(jié)果與分析
    3 討論
    參考文獻(xiàn)
第四章 結(jié)論
第五章 文獻(xiàn)綜述
    1 低氧誘導(dǎo)因子α
    2 cre-loxp系統(tǒng)
    3 角蛋白K14啟動(dòng)子
    4 內(nèi)蒙古白絨山羊
    參考文獻(xiàn)
致謝
攻讀碩士學(xué)位期間所發(fā)表的學(xué)術(shù)論文



本文編號：3389204