豬繁殖與呼吸綜合征是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒（Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus, PRRSV）引起的以妊娠母豬繁殖障礙、小豬呼吸道癥狀為主要特征的嚴重豬傳染疾病。高致病性豬繁殖與呼吸綜合征病毒（HP-PRRSV）于2006年首次在中國發(fā)現(xiàn),以高熱、高致病性、高死亡率為典型特征。已有的研究證明前列腺素E2（Prostaglandin E2, PGE2）是導致發(fā)熱的關鍵因子,且環(huán)氧合酶1/2（COX-1/2）介導的酶促反應是PGE2合成過程中的關鍵限速步驟。但是HP-PRRSV引起高熱背后的機制以及COX和PGE2在其中的作用目前仍不清楚。在本研究中,首先發(fā)現(xiàn)豬的死亡時間同小豬感染后期體溫之間有明顯的相關性,即感染后期體溫越高的小豬死亡的時間也越早。并且HP-PRRSV顯著增強感染小豬血清和肺泡灌洗液及感染PAMs（豬肺泡巨噬細胞）中PGE2的分泌。然后通過real-time PCR、western blot等方法我們發(fā)現(xiàn)PRRSV能夠顯著上調PAMs中COX-1的mRNA和蛋白水平。較COX-2的特異性抑制劑來說,CO... 

【文章來源】：中國農(nóng)業(yè)大學北京市 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：97 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略詞表
第一章 引言
    1.1 豬繁殖與呼吸綜合征概述
        1.1.1 歷史與分布
        1.1.2 臨床癥狀
    1.2 豬繁殖與呼吸綜合征病毒概述
        1.2.1 病原
        1.2.2 分子生物學特征
        1.2.3 PRRSV的感染靶細胞與機制
    1.3 PRRSV的流行病學特征
        1.3.1 感染率高
        1.3.2 易感動物
        1.3.3 傳播與防治
    1.4 高致病性豬繁殖與呼吸綜合征病毒
    1.5 發(fā)熱
        1.5.1 致熱原和激活物的概念
        1.5.2 致熱源作用部位
        1.5.3 致熱原的作用方式
    1.6 前列腺素E_2
        1.6.1 PGE_2概述
        1.6.2 PGE_2合成
        1.6.3 PGE_2和發(fā)熱
    1.7 MAPK信號通路
        1.7.1 MAPK
        1.7.2 ERK1/2
        1.7.3 p38 MAPK
    1.8 Protein kinase C
    1.9 CCAAT增強子結合蛋白β(CCAAT-enhancer-binding proteins,C/EBP-β
        1.9.1 C/EBP
        1.9.2 C/EBP-β
    1.10 研究目的及意義
第二章 實驗材料和研究方法
    2.1 實驗材料
        2.1.1 儀器
        2.1.2 主要實驗試劑
        2.1.3 試劑配制
        2.1.4 菌種及質粒
        2.1.5 病毒和細胞
        2.1.6 細胞培養(yǎng)和病毒感染
        2.1.7 病毒TCID50的檢測方法
        2.1.8 實驗動物
    2.2 實驗方法
        2.2.1 繁毒
        2.2.2 病毒紫外滅活
        2.2.3 攻毒以及體溫檢測
        2.2.4 BALF(Bronchoalveolar lavage fluid)和血清的獲取
        2.2.5 原核表達質粒的構建及原核表達
        2.2.6 多克隆抗體制備
        2.2.7 流式細胞術檢測PAMs胞內COX-1/2蛋白表達情況
        2.2.8 實時定量PCR
        2.2.9 信號通路抑制試驗
        2.2.10 Western blot實驗
        2.2.11 COX-1啟動子和突變質粒的構建
        2.2.12 質粒小量提取
        2.2.13 質粒轉染實驗
        2.2.14 雙熒光素酶報告檢測試驗
        2.2.15 siRNA試驗
        2.2.16 激光共聚焦
        2.2.17 ELISA檢測PGE_2量
        2.2.18 細胞組分核質分離
        2.2.19 染色質免疫共沉淀試驗(ChIP)
        2.2.20 統(tǒng)計學處理
第三章 PRRSV通過ERK1/2-C/EBP-β通路上調COX-1從而導致PGE_2上升
    3.1 實驗結果與分析
        3.1.1 HP-PRRSV感染能夠上調PGE_2水平
        3.1.2 PRRSV感染PAMs上調COX-1的mRNA水平
        3.1.3 COX-1多克隆抗體的制備
        3.1.4 PRRSV感染PAMs能夠上調COX-1蛋白水平的表達
        3.1.5 HP-PRRSV能夠通過上調COX-1引起PGE_2表達升高
        3.1.6 PRRSV通過MEK-ERK1/2信號通路誘導COX-1表達
        3.1.7 豬COX-1啟動子的克隆和序列分析
        3.1.8 HP-PRRSV通過誘導C/EBP-β磷酸化來激活COX-1表達
    3.2 討論
        3.2.1 HP-PRRSV導致致熱源PGE_2的分泌增加
        3.2.2 HP-PRRSV上調COX-1而不是COX-2并促進PGE_2的分泌
        3.2.3 HP-PRRSV通過ERK1/2-p-C/EBP-β途徑激活COX-1
結論
參考文獻
致謝
個人簡介


【參考文獻】：
期刊論文
[1]The Interferon Signaling Network and Transcription Factor C/EBP-β[J]. Padmaja Gade,Dhan V.Kalvakolanu.  Cellular & Molecular Immunology. 2007(06)



本文編號：3375443