RNA干擾（RNAinterference,RNAi）是一種強大的基因沉默技術,它的發(fā)現(xiàn)為了解病毒與宿主之間的相互作用提供了又一新視角,在抗病毒領域有著廣泛的應用前景。豬繁殖與呼吸綜合征（俗稱藍耳病,PRRS）是危害豬業(yè)生產的重大疫病之一,在全世界受到高度關注。研究表明,PRRS病毒（PRRSV）復制過程中也存在RNAi現(xiàn)象,并成功構建特異性靶向PRRSV基因組的高效表達shRNA質粒和病毒載體,為豬繁殖與呼吸綜合征防治提供了新的探索方向。哺乳動物胚胎生物技術的日益發(fā)展及其與現(xiàn)代分子生物學技術的結合,使得利用遺傳修飾開展轉基因抗病育種成為可能。轉基因克隆技術是以轉基因體細胞為核供體,通過核移植生產轉基因胚胎或動物的一種先進技術手段。將RNAi和轉基因克隆技術相結合制備轉基因動物,已被用作人類疾病的動物模型及動物抗病育種研究；但迄今尚未見到具有抗豬藍耳病特性的相關轉基因動物生產的報道。轉基因克隆技術本身依然存在效率低、外源基因表達不穩(wěn)定等問題。已有的研究表明,體細胞重編程過程中,DNA甲基化、組蛋白乙�；瘜寺⌒屎娃D基因表達都有直接的影響。本研究將具有抗PRRSV特性的shRNA表達盒... 

【文章來源】：南京農業(yè)大學江蘇省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數】：137 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
符號及縮略語
前言
第一部分 文獻綜述
    第一章 體細胞核移植與轉基因動物生產
        1 動物體細胞核移植
        1.1 體細胞核移植技術研究簡史
            1.2 體細胞核移植程序
                1.2.1 受體細胞準備
                1.2.2 供核細胞的選擇
                1.2.3 重構胚的構建
                1.2.4 重構胚激活
                1.2.5 克隆胚胎培養(yǎng)
            1.3 體細胞核移植重編程機理
                1.3.1 DNA甲基化
                1.3.2 組蛋白乙�；�
                1.3.3 基因印跡
                1.3.4 端粒問題
        2 轉基因動物生產
            2.1 轉基因動物的制作方法
                2.1.1 原核注射法
                2.1.2 病毒載體法
                2.1.3 精子載體法
                2.1.4 胚胎干細胞法
                2.1.5 體細胞核移植法
            2.2 轉基因動物應用
                2.2.1 在生命科學研究領域的應用
                2.2.2 在醫(yī)學研究領域的應用
                2.2.3 在畜牧改良上的應用
                2.2.4 動物抗病育種
                2.2.5 動物生物反應器
        3 影響轉基因克隆動物生產的因素
            3.1 克隆程序
                3.1.1 受體卵母細胞質量
                3.1.2 供核細胞
            3.2 表觀遺傳修飾對外源基因表達的影響
        參考文獻
    第二章 RNAi技術在動物抗病毒研究中的應用前景
        1 RNAi技術
        2 RNAi技術原理
        3 RNAi技術在動物抗病毒研究中的應用
        4 病毒逃逸RNAi
        5 基于RNAi技術的轉基因動物生產
        6 RNAi的問題和展望
        參考文獻
第二部分 試驗研究
    第三章 靶向PRRSV的shRNA轉基因表達載體構建及其功能驗證
        摘要
        1 材料
        2 方法
        3 結果
            3.1 shRNA轉基因表達載體構建結果
            3.2 shRNA轉基因表達載體在Marc145細胞上抑制PRRSV復制試驗
        4 討論
        5 小結
        參考文獻
    第四章 核供體細胞對豬轉基因克隆胚胎體外生產的影響
        摘要
        1 材料
        2 方法
        3 結果
            3.1 豬成纖維細胞建系
            3.2 G418篩選
            3.3 陽性細胞克隆的PCR鑒定
            3.4 轉基因核供體細胞對豬克隆胚胎發(fā)育的影響
        4 討論
            4.1 豬成纖維細胞的分離培養(yǎng)
            4.2 轉基因陽性細胞克隆的篩選、傳代培養(yǎng)和保存
            4.3 不同轉基因供核細胞對豬克隆胚發(fā)育的影響
        5 小結
        參考文獻
    第五章 豬轉基因克隆胚胎體外發(fā)育的研究
        摘要
        1 材料
        2 方法
        3 結果
            3.1 培養(yǎng)液對豬孤雌激活胚胎體外發(fā)育的影響
            3.2 激活方法對豬轉基因克隆胚胎體外發(fā)育的影響
            3.3 曲古抑菌素A對豬轉基因克隆胚胎體外發(fā)育的影響
        4 討論
            4.1 胚胎體外培養(yǎng)液
            4.2 重構胚激活
            4.3 曲古抑菌素A對豬轉基因克隆胚胎體外發(fā)育的影響
        5 小結
        參考文獻
    第六章 曲古抑菌素A影響豬轉基因克隆胚胎發(fā)育的機理研究
        摘要
        1 材料
        2 方法
        3 結果
            3.1 曲古抑菌素A對豬轉基因克隆胚胎組蛋白乙�；降挠绊�
            3.2 曲古抑菌素A對豬轉基因克隆胚胎發(fā)育相關基因表達的影響
            3.3 曲古抑菌素A對豬轉基因克隆胚胎外源基因表達的影響
        4 討論
            4.1 豬轉基因克隆胚胎表觀遺傳修飾狀態(tài)與胚胎的發(fā)育
            4.2 豬轉基因克隆胚胎發(fā)育相關基因表達與胚胎的發(fā)育
            4.3 豬轉基因克隆胚胎表觀遺傳修飾狀態(tài)與外源基因表達
        5 小結
        參考文獻
全文結論
創(chuàng)新點
攻讀博士學位期間論文發(fā)表情況
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
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博士論文
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本文編號：3373150