EV71（Enterovirus71）引發(fā)的手足口病在近年來(lái)的發(fā)病率仍然很高。截止目前，對(duì)于EV71感染，尚沒(méi)有有效的疫苗和治療辦法。干擾素作為廣譜抗病毒藥物，已成功用于多種病毒感染疾病的治療，研究顯示干擾素可抑制EV71的復(fù)制，但EV71病毒也可在一定程度上逃避干擾素的抑制作用。本實(shí)驗(yàn)旨在探索EV71拮抗干擾素抗病毒作用的機(jī)制。本實(shí)驗(yàn)獲取五株EV71病毒：安徽株（Anhui2007）一株，VR1432和VR1775（購(gòu)自ATCC，American Type Culture Collection，美國(guó)模式菌種保藏庫(kù)），GDV103和GDV102（購(gòu)自CCTCC，China Center for Type Culture Collection，中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心）。根據(jù)GenBank中EV71的全基因組序列設(shè)計(jì)了6對(duì)引物，分段擴(kuò)增了覆蓋EV71（安徽株，VR1432，GDV103）基因組全長(zhǎng)序列的6個(gè)重疊片段，并進(jìn)行序列測(cè)定和分析。三株EV71全基因組核苷酸序列已被GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)收錄，Anhui2007（安徽株）、VR1432和GDV103的登陸編號(hào)分別為KC954662、KC... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)人民解放軍軍事科學(xué)院北京市

【文章頁(yè)數(shù)】：81 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

EV71基因組結(jié)構(gòu)

S RTase Mix ward erse R 程序如下：95℃ 10s；擴(kuò)增反應(yīng) 95℃ 5s，55℃-95℃ 做融解曲線。測(cè)定 的滴度如下：Anhui2007：8×106 PFU/ml；VR14326 PFU/ml；GDV103：60×106 PFU/ml；GDV102：

圖 1.2 EV71 全序列 nt 遺傳進(jìn)化分析2.3 結(jié)晶紫染色結(jié)果結(jié)晶紫染色的方法能夠直觀反應(yīng)細(xì)胞病變。病毒感染細(xì)胞后，隨著感染時(shí)間的延長(zhǎng)，細(xì)胞病變而死亡脫落。結(jié)晶紫作為一種活細(xì)胞染料，只能對(duì)活細(xì)胞著色。而預(yù)先進(jìn)行不同濃度的干擾素保護(hù)后，病毒的復(fù)制會(huì)受到不同程度的抑制，則根據(jù)活細(xì)胞數(shù)的不同，結(jié)晶紫的著色深淺會(huì)與干擾素濃度呈現(xiàn)一致性。從結(jié)晶紫染色分析的結(jié)果看，在 Vero E6 細(xì)胞中，IFN-ω 比 IFN-α2b 的保護(hù)效果要好（見(jiàn)圖1.3）。從圖 1.3 看，IFN-ω 保護(hù) VR1432、Anhui、GDV103 和 GDV102 四株病毒感染細(xì)胞的 EC50 分別為 1810.7 IU/ml、931.5 IU/ml、385.8 IU/ml、40.6 IU/ml；IFN-α2b 保護(hù) GDV102 感染細(xì)胞的 EC50 為 846.9 IU/ml，當(dāng) IFN-α2b 的濃度達(dá)到50000 IU/ml 時(shí)，對(duì) VR1432、Anhui、GDV103 三株病毒感染的細(xì)胞仍沒(méi)有達(dá)到100%的保護(hù)效果。2.4 定量 PCR 法檢測(cè)干擾素對(duì) EV71 復(fù)制的影響

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]The interferon inducing pathways and the hepatitis C virus[J]. Eliane F Meurs,Adrien Breiman.  World Journal of Gastroenterology. 2007(17)



本文編號(hào)：3369040