促卵泡激素FSH是由垂體前葉嗜堿性細(xì)胞合成并分泌的一種糖蛋白類促性腺激素,由α亞基和β亞基通過(guò)非共價(jià)鍵結(jié)合而形成,常用于增進(jìn)動(dòng)物的快速繁殖,誘導(dǎo)雌性動(dòng)物超數(shù)排卵。獸用促卵泡激素FSH多數(shù)是采用從垂體中提取,人用FSH一般是采用尿源性的FSH,即從絕經(jīng)期婦女尿液中提取,但是生產(chǎn)成本依舊較高,且純度無(wú)法達(dá)到99%。如果進(jìn)一步提高純度,成本只會(huì)更加昂貴。因此本研究使用重組DNA技術(shù)對(duì)重組綿羊FSH進(jìn)行分泌表達(dá)并對(duì)其進(jìn)行應(yīng)用研究。首先對(duì)重組綿羊促卵泡激素FSH序列進(jìn)行設(shè)計(jì),構(gòu)建重組表達(dá)質(zhì)粒pcDNA3.1-FSHβα。構(gòu)建好的重組表達(dá)質(zhì)粒通過(guò)電轉(zhuǎn)染至CHO-K1細(xì)胞中,轉(zhuǎn)染后利用G418篩選出單克隆細(xì)胞M-FSH-βα-B31A4,單克隆細(xì)胞表達(dá)重組綿羊FSH的含量達(dá)到350 ng/mL。使用5 L生物反應(yīng)器對(duì)單克隆細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng),培養(yǎng)68 h收集細(xì)胞上清液。之后采用分子量為10 kD的膜包對(duì)細(xì)胞上清液超濾濃縮,得到531ng/mL的重組綿羊促卵泡激素FSHβα。重組綿羊促卵泡激素FSHβα制備完成后,采用多次皮下注射雌鼠的方法進(jìn)行試驗(yàn),注射一次后,間隔一天再次進(jìn)行注射,72 h后對(duì)雌鼠進(jìn)行眼球... 

【文章來(lái)源】：西北民族大學(xué)甘肅省

【文章頁(yè)數(shù)】：68 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

核酸同源性分析

Fig 1 Nucleic acid homology analysis氨基酸密碼子優(yōu)化前后同源性為100%。圖2 氨基酸同源性分析Fig 2 Amino acid homology analysis經(jīng)過(guò)密碼子優(yōu)化后，氨基酸與之前序列同源性為100%，則接著進(jìn)行信號(hào)肽分

圖 3 信號(hào)肽分析Fig 3 Signal PeptideAnalysis結(jié)果顯示，該段氨基酸序列具有信號(hào)肽，從 S-score 值大致可以確定，信前 20 位，然后觀察 S-score 較陡峭的位置和有較高位置的 Y-score，確定

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號(hào)：3367181