禽網狀內皮組織增生癥（Reticuloendotheliosis）是由C型逆轉錄病毒禽網狀內皮組織增生癥病毒（Reticuloendotheliosis virus,REV）引起的一系列癥狀的總稱,主要包括矮小綜合征、急性網狀細胞瘤和慢性組織腫瘤;其病原是目前己知的家禽中第三種腫瘤病病原。目前用于REV檢測的方法雖然靈敏度高、準確性強,但耗時長,需要專業(yè)人員和專業(yè)設備,基層推廣條件不理想。為此,需要一種簡便快捷的檢測方法來檢測REV。本論文設計研制了一種以檢測REV主要免疫原性蛋白p30的兩種單抗,REVp30-2C8、REVp30-5G6為基礎的免疫膠體金層析試紙條,具有良好的特異性,靈敏度和ELISA試劑盒相當,且快速、靈敏、準確,5-15min即可出結果;檢測樣本涵蓋肛拭子、喉拭子等,采樣方便,不需專業(yè)設備;成本低廉且具有良好的基層推廣價值,在生產實際中將產生重要作用。1.兩種單克隆抗體與膠體金結合條件的選擇本研究參考Frens控制還原劑量以控制膠體金粒徑大小的方法,成功制備了粒徑為15nm、30nm、40nm的膠體金,通過肉眼觀察,透射電鏡,膠體金試驗的方法鑒定其適用性。而后,... 

【文章來源】：揚州大學江蘇省

【文章頁數(shù)】：68 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１?ＲＥＶ病毒結構??Ｆｉｇ．ｌ?Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ?ｏｆ?Ｒｅｔｉｃｕｌｏｅｎｄｏｔｈｅｌｉｏｓｉｓ?ｖｉｒｕｓ??

圖２?ＲＥＶ基因組??Ｆｉｇ．２?Ｇｅｎｏｍｅ?ｏｆ?Ｒｅｔｉｃｕｌｏｅｎｄｏｔｈｅｌｉｏｓｉｓ?ｖｉｒｕｓ??根據(jù)ＲＥＶ病毒的復制特點，病毒被分為完全復制型和缺陷型兩種病毒群［１８］。完全復??制型基因組全長約９．０ｋｂ［１９］，兩端為長末端重復序列（ｌｏｎｇ?ｔｅｒｍｉｎａｌ?ｒｅｐｅａｔ?ｓｅｑｕｅｎｃｅ，?ＬＴＲ），??從５’端到３’端含有ＰＢＳ引物結合區(qū)、ｇａｇ、ｐｏ／和ｅ？ｖ等結構基因卿。而ＲＥＶ－Ｔ株作為缺??陷型（不完全復制型）的基因組長度僅約５．７ｋｂｔ２ｌｌ?ｇａｇ－ｐｏ／部分大段缺失，部分少量??缺失因此需要輔助病毒ＲＥＶ－Ａ的參與才能進行病毒復制％。缺陷型ＲＥＶ病毒在ｅ？ｖ??區(qū)含有一個大小約〇．８￣１．５ｋｂ的替代片段，稱為Ｖ－ｒｅｌ基因［２４］，其編碼產物很可能是Ｔ株的??致瘤性蛋白，具有轉化宿主淋巴細胞的能力。其他完全復制型ＲＥＶ基因組不包含Ｖ－ｒｅｌ片??段，故而只有缺陷型病毒才會引起急性腫瘤誘發(fā)大規(guī)模死亡［２５］。??１．４蛋白組成??

圖３雙電子層環(huán)繞的膠體金顆粒??Ｆｉｇ．３?Ｃｏｌｌｏｉｄａｌ?ｇｏｌｄ?ｐａｒｔｉｃｌｅ?ｗｒａｐｐｅｄ?ｂｙ?ｄｏｕｂｌｅ?ｅｌｅｃｔｒｏｎ?ｌａｙｅｒ??記過程即標記物蛋白質等與膠體金顆粒發(fā)生吸附的過程。體結合過程中存在三種不同的作用力，靜電引力、疏水顆粒與蛋白質上的正電位氨基發(fā)生反應，蛋白質中的半生成配位鍵。第二步蛋白質疏水吸附到金顆粒表面。膠蛋白質親水基團與疏水性膠體相互吸引結合使其達到配荷引力降低。當ｐＨ值調節(jié)至適當界限時，蛋白質電荷為因靜電引力聚集，在蛋白質親水作用和膠體金顆粒疏水質結合。蛋白質等大分子物質與膠體金的結合主要是物。結合后需加入包括牛血清蛋白（ＢＳＡ）、聚乙二醇（Ｐ未被占據(jù)的位點以減少非特異性反應，穩(wěn)定膠體金懸膠


本文編號：3346916