偽狂犬病毒沿神經(jīng)元細胞軸突運輸?shù)某醪窖芯?/H1>
發(fā)布時間：2021-08-13 06:31
偽狂犬病毒（Pseudorabies virus,PRV）屬于α皰疹病毒亞科,具有嗜神經(jīng)性,能夠侵染宿主后在外周神經(jīng)系統(tǒng)建立潛伏感染,使宿主終生帶毒。PRV病毒粒子由內(nèi)到外分為雙鏈DNA、衣殼、被膜蛋白、囊膜蛋白四層,其中被膜蛋白又分為內(nèi)層被膜蛋白和外層被膜蛋白,內(nèi)層被膜蛋白一般與核衣殼連接,外層被膜蛋白一般與膜蛋白的胞漿區(qū)相連接。病毒侵入神經(jīng)元的過程與侵染大多數(shù)培養(yǎng)的傳代細胞的過程很相似。首先,在外周神經(jīng)系統(tǒng)的軸突末端病毒的囊膜蛋白與細胞膜融合,然后核衣殼沿著軸突微管逆行運輸?shù)郊毎w的細胞核。同時內(nèi)層被膜蛋白（UL36、 UL37）和US3也能隨核衣殼逆行運輸至細胞核。但是,病毒粒子由神經(jīng)元細胞體沿軸突順行運輸至軸突遠端的機制存在很大爭議,一些學者認為病毒在神經(jīng)元細胞體完成組裝形成成熟病毒粒子沿軸突運輸至軸突末端釋放,另一部分學者認為病毒的核衣殼和囊膜蛋白分別沿軸突運輸至軸突末端,然后在軸突末端完成組裝釋放。最近發(fā)現(xiàn)在海馬神經(jīng)元的軸突起始段（axon initial segment, AIS）的胞漿中存在一個由肌動蛋白和錨定蛋白G構(gòu)成的“分子篩”（the cytoplasmic fi...
【文章來源】：華中農(nóng)業(yè)大學湖北省 211工程院校 教育部直屬院校
【文章頁數(shù)】：68 頁
【學位級別】：碩士
【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略語表（Abbreviation)
第1章 文章綜述
引言
1.1 偽狂犬病毒流行病毒學
1.2 偽狂犬病毒的分子生物學
1.3 偽狂犬病毒的軸突運輸
1.4 微流體系統(tǒng)
1.5 神經(jīng)元分子篩
1.6 研究的目的和意義
第2章 材料和方法
2.1 試驗材料
2.1.1 病毒、細胞、菌種與質(zhì)粒
2.1.2 實驗儀器及耗材
2.1.3 酶及主要試劑
2.1.4 主要溶液及培養(yǎng)基的配制
2.1.5 抗體
2.1.6 本研究中所用的寡核苷酸引物
2.2 試驗方法
2.2.1 中間轉(zhuǎn)移質(zhì)粒的構(gòu)建
2.2.2 重組病毒的構(gòu)建
2.2.3 Western blotting
2.2.4 雞胚背根神經(jīng)節(jié)(DRG)外植體培養(yǎng)
2.2.5 雞胚背根神經(jīng)節(jié)(DRG)細胞的原代培養(yǎng)
2.2.6 蓋玻片或培養(yǎng)皿的包被
2.2.7 體外培養(yǎng)背根神經(jīng)節(jié)細胞的間接免疫熒光檢測
2.2.8 微流體系統(tǒng)的組裝及細胞培養(yǎng)和接毒
2.2.9 活細胞成像技術(shù)
第3章 結(jié)果和分析
3.1 重組示蹤病毒的構(gòu)建與鑒定
3.1.1 PRV gB-RFP重組示蹤病毒的構(gòu)建
3.1.2 PRV VP16-EGFP重組示蹤病毒的構(gòu)建
3.1.3 PRV EGFP-VP1/2重組示蹤病毒的構(gòu)建
3.1.4 PRV EGFP-VP26重組示蹤病毒的構(gòu)建
3.2 重組示蹤病毒生物學特性分析
3.2.1 空斑大小比較
3.2.2 一步法生長曲線
3.3 DRG神經(jīng)細胞的原代培養(yǎng)
3.4 間接免疫熒光
3.5 小鼠成神經(jīng)瘤細胞(N2a)的刺激分化
3.6 原代培養(yǎng)的神經(jīng)細胞攻毒后活細胞成像
3.7 微流體系統(tǒng)中原代培養(yǎng)DRG細胞及攻毒后觀察
第4章 討論和結(jié)論
4.1 重組示蹤病毒
4.2 DRG細胞的原代培養(yǎng)
4.3 PRV的軸突運輸
4.4 微流體系統(tǒng)
4.5 有關(guān)神經(jīng)元分子篩
4.6 結(jié)論
參考文獻
致謝
【參考文獻】：
期刊論文
[1]極性蛋白與中樞神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育[J]. 趙婧,屈藝,母得志. 國際病理科學與臨床雜志. 2011(04)
[2]豬偽狂犬病的流行病學和防制措施[J]. 李宏民,李克良,姚淑紅,劉思當. 獸醫(yī)導刊. 2010(05)
[3]軸突起始段胞漿屏障與神經(jīng)元蛋白的極性分布[J]. 宋璦宏,王冬,陳罡,李玉菊,羅建紅,段樹民,蒲慕明. 中國基礎(chǔ)科學. 2009(03)
[4]偽狂犬病病毒鄂A株TK-/gE-/gI-基因缺失疫苗的安全性和保護力研究[J]. 劉正飛,陳煥春,吳斌,何啟蓋,秦永輝. 畜牧獸醫(yī)學報. 2004(01)
碩士論文
[1]偽狂犬病毒Ea株主要衣殼蛋白之間的相互作用研究[D]. 薛念波.華中農(nóng)業(yè)大學 2008
本文編號：3339944
本文鏈接：http://www.sikaile.net/yixuelunwen/dongwuyixue/3339944.html
【文章來源】：華中農(nóng)業(yè)大學湖北省 211工程院校 教育部直屬院校
【文章頁數(shù)】：68 頁
【學位級別】：碩士
【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略語表（Abbreviation)
第1章 文章綜述
引言
1.1 偽狂犬病毒流行病毒學
1.2 偽狂犬病毒的分子生物學
1.3 偽狂犬病毒的軸突運輸
1.4 微流體系統(tǒng)
1.5 神經(jīng)元分子篩
1.6 研究的目的和意義
第2章 材料和方法
2.1 試驗材料
2.1.1 病毒、細胞、菌種與質(zhì)粒
2.1.2 實驗儀器及耗材
2.1.3 酶及主要試劑
2.1.4 主要溶液及培養(yǎng)基的配制
2.1.5 抗體
2.1.6 本研究中所用的寡核苷酸引物
2.2 試驗方法
2.2.1 中間轉(zhuǎn)移質(zhì)粒的構(gòu)建
2.2.2 重組病毒的構(gòu)建
2.2.3 Western blotting
2.2.4 雞胚背根神經(jīng)節(jié)(DRG)外植體培養(yǎng)
2.2.5 雞胚背根神經(jīng)節(jié)(DRG)細胞的原代培養(yǎng)
2.2.6 蓋玻片或培養(yǎng)皿的包被
2.2.7 體外培養(yǎng)背根神經(jīng)節(jié)細胞的間接免疫熒光檢測
2.2.8 微流體系統(tǒng)的組裝及細胞培養(yǎng)和接毒
2.2.9 活細胞成像技術(shù)
第3章 結(jié)果和分析
3.1 重組示蹤病毒的構(gòu)建與鑒定
3.1.1 PRV gB-RFP重組示蹤病毒的構(gòu)建
3.1.2 PRV VP16-EGFP重組示蹤病毒的構(gòu)建
3.1.3 PRV EGFP-VP1/2重組示蹤病毒的構(gòu)建
3.1.4 PRV EGFP-VP26重組示蹤病毒的構(gòu)建
3.2 重組示蹤病毒生物學特性分析
3.2.1 空斑大小比較
3.2.2 一步法生長曲線
3.3 DRG神經(jīng)細胞的原代培養(yǎng)
3.4 間接免疫熒光
3.5 小鼠成神經(jīng)瘤細胞(N2a)的刺激分化
3.6 原代培養(yǎng)的神經(jīng)細胞攻毒后活細胞成像
3.7 微流體系統(tǒng)中原代培養(yǎng)DRG細胞及攻毒后觀察
第4章 討論和結(jié)論
4.1 重組示蹤病毒
4.2 DRG細胞的原代培養(yǎng)
4.3 PRV的軸突運輸
4.4 微流體系統(tǒng)
4.5 有關(guān)神經(jīng)元分子篩
4.6 結(jié)論
參考文獻
致謝
【參考文獻】：
期刊論文
[1]極性蛋白與中樞神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育[J]. 趙婧,屈藝,母得志. 國際病理科學與臨床雜志. 2011(04)
[2]豬偽狂犬病的流行病學和防制措施[J]. 李宏民,李克良,姚淑紅,劉思當. 獸醫(yī)導刊. 2010(05)
[3]軸突起始段胞漿屏障與神經(jīng)元蛋白的極性分布[J]. 宋璦宏,王冬,陳罡,李玉菊,羅建紅,段樹民,蒲慕明. 中國基礎(chǔ)科學. 2009(03)
[4]偽狂犬病病毒鄂A株TK-/gE-/gI-基因缺失疫苗的安全性和保護力研究[J]. 劉正飛,陳煥春,吳斌,何啟蓋,秦永輝. 畜牧獸醫(yī)學報. 2004(01)
碩士論文
[1]偽狂犬病毒Ea株主要衣殼蛋白之間的相互作用研究[D]. 薛念波.華中農(nóng)業(yè)大學 2008
本文編號：3339944
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