發(fā)布時間：2021-08-12 17:01

　　利用反向遺傳技術(shù)對口蹄疫病毒基因的改造和修飾，可以實現(xiàn)對疫苗種毒的生產(chǎn)性能、抗原匹配性、抗原穩(wěn)定性、免疫應(yīng)答能力、生物安全性等特征的改良，能夠迅速獲得預(yù)期生物學特性的疫苗候選株，進而可以減少和避免流行毒株馴化環(huán)節(jié)帶來的負面影響。不僅改變了對流行毒株篩選馴化受病毒自然屬性制約、費時費力、成功率低的缺陷，而且可以實現(xiàn)更為主動有效的疫苗毒株的設(shè)計，對整體提升疫苗品質(zhì)和效力具有重大意義。為了鑒定出在口蹄疫病毒插入的位點和獲得標記的重組病毒，本研究利用口蹄疫病毒反向遺傳操作技術(shù)，在RGD+9位點處插入了His標簽，獲得了含有His標簽的FMDV全長cDNA克隆（命名為prAsiaI-9His）。將prAsiaI-9His質(zhì)粒轉(zhuǎn)染BHK-21細胞后，能夠出現(xiàn)典型的細胞病變。對收獲的病毒分別用RT-PCR、間接免疫熒光進行鑒定，結(jié)果證實，成功拯救了His標簽的重組病毒（命名為rAsiaI-9His），該毒能夠穩(wěn)定表達His標簽。最后，比較測定了對BHK-21細胞和乳鼠的致病性，結(jié)果表明，該標記毒與親本拯救的毒株（rAsiaI）具有相似的生物特性。通過對重組毒rAsiaI-9His的致病性試驗表明口蹄... 

【文章來源】：新疆農(nóng)業(yè)大學新疆維吾爾自治區(qū)

【文章頁數(shù)】：54 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

Asia1-FMDVP12A基因PCR擴增結(jié)果

.DL5000 DNA 相對分子質(zhì)量標準標準;1.陽性樣 2-1Asia1-FMDV P12A 基因 PCR 擴增結(jié)1 The amplification of Asia1-FMDV P12A粒 pAsiaI-His 的鑒定 引入 His 標簽的 P12A 片段使用 A段構(gòu)建了含有 His 標簽的重組質(zhì)粒laI 雙酶切鑒定，結(jié)果出現(xiàn)與預(yù)期相

M.DL5000 DNA 相對分子質(zhì)量標準;1.陽性樣品圖 2-3 重組質(zhì)粒 prAsiaI-9His 酶切鑒定etically engineered recombinant plasmid PrAsia研究 RNA 病毒分子致病機制的有效途感染性常常比病毒 RNA 的要弱[49]，且救的效率，病毒拯救效率低已經(jīng)成為體種無需體外制備病毒 RNA 轉(zhuǎn)錄本，并A 聚合酶為基礎(chǔ)的病毒拯救系統(tǒng)的建立研究病毒 RNA 基因結(jié)構(gòu)和功能提供了于 T7 RNA 聚合酶的體內(nèi)病毒拯救系統(tǒng)性克隆技術(shù)使得病毒蛋白與標簽表位的

【參考文獻】：
期刊論文
[1]型內(nèi)嵌合口蹄疫病毒全長感染性cDNA克隆的構(gòu)建[J]. 李平花,白興文,盧增軍,孫普,祁國財,韓成昊,劉在新.  微生物學報. 2012(01)



本文編號：3338716