卵泡抑制素（follistatin, FST）是一種單鏈糖蛋白,也被稱為卵泡休止素或者性激素抑制蛋白。它由單基因編碼,編碼區(qū)分為三個(gè)結(jié)構(gòu)功能域,其中第一結(jié)構(gòu)功能域與肌肉的生長有關(guān),在高等動物幾乎所有的組織中都有表達(dá),具有廣泛的生理作用。FST可以抑制轉(zhuǎn)化生長因子（transforming growth factor, TGF）β超家族中的大部分成員蛋白的活性通過與其結(jié)合,從而有利于肌纖維發(fā)生廣泛的肥大和增生。FST可與肌肉生長抑素（Myostatin）的C-端結(jié)合,抑制肌肉生長抑素跟受體結(jié)合,從而促進(jìn)骨骼肌發(fā)育。本實(shí)驗(yàn)以民豬的FST基因?yàn)檠芯繉ο?采用克隆測序的方法得到FST基因的編碼區(qū)。通過把骨骼肌特異性啟動子a-actin和FST基因編碼區(qū)插入到pEGFP-Cl載體中構(gòu)建了可以在小鼠骨骼肌細(xì)胞中特異表達(dá)的pEGFP-Cl-α-actin-FST載體（P3載體）和pEGFP-Cl-CMV-a-actin-FST載體（P4載體）。Real-time PCR檢測目的基因FST及其相關(guān)基因MYOD、 MYOG、MSTN、GDF11的相對表達(dá)量。本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果如下：（1）成功克隆了豬FST基... 

【文章來源】：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)黑龍江省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：59 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 前言
    1.1 FST基因
        1.1.1 FST基因結(jié)構(gòu)特征
        1.1.2 FST基因生物學(xué)功能
        1.1.3 FST基因?qū)∪馍L的影響
        1.1.4 FST基因與其他基因的互作研究
    1.2 雙啟動子
    1.3 實(shí)驗(yàn)?zāi)康呐c意義
2 材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)動物及細(xì)胞
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑及耗材
        2.1.3 主要儀器設(shè)備
        2.1.4 主要藥品的配制
        2.1.5 主要生物學(xué)軟件
        2.1.6 實(shí)驗(yàn)相關(guān)生物信息學(xué)軟件
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 引物設(shè)計(jì)
        2.2.2 目的片段的亞克隆
        2.2.3 真核表達(dá)載體的構(gòu)建
        2.2.4 細(xì)胞的培養(yǎng)
        2.2.5 瞬時(shí)轉(zhuǎn)染
        2.2.6 雙熒光素酶活性的測定
        2.2.7 統(tǒng)計(jì)分析
        2.2.8 細(xì)胞中總RNA的提取與反轉(zhuǎn)錄cDNA的合成
        2.2.9 Real-time PCR的檢測
3 結(jié)果與分析
    3.1 豬FST基因的克隆與測序結(jié)果
        3.1.1 FST基因編碼區(qū)的PCR擴(kuò)增結(jié)果
        3.1.2 重組克隆質(zhì)粒PMD18-T-FST的酶切鑒定
        3.1.3 民豬FST基因編碼區(qū)測序結(jié)果
    3.2 α-actin的基因的克隆與測序結(jié)果
        3.2.1 α-actin的PCR擴(kuò)增結(jié)果
        3.2.2 重組質(zhì)粒pMD18-T-α-actin的酶切鑒定
        3.2.3 α-actin測序結(jié)果
    3.3 P1重組質(zhì)粒雙酶切鑒定結(jié)果
        3.3.1 pGL3-basic質(zhì)粒與pMD18-T-α-actin質(zhì)粒的酶切結(jié)果
        3.3.2 P1重組質(zhì)粒菌液PCR鑒定結(jié)果
        3.3.3 P1重組質(zhì)粒酶切鑒定結(jié)果
    3.4 P2重組質(zhì)粒雙酶切鑒定結(jié)果
        3.4.1 pEGFP-C1質(zhì)粒與pMD18-T-α-actin質(zhì)粒的酶切結(jié)果
        3.4.2 pEGFP-C1-CMV-α-actin菌液PCR鑒定結(jié)果
        3.4.3 pEGFP-C1-CMV-α-actin重組質(zhì)粒酶切鑒定結(jié)果
        3.4.4 CMV-actin的克隆與測序結(jié)果
        3.4.5 pGL3-basic質(zhì)粒與pMD18-T-CMV-α-actin質(zhì)粒的酶切結(jié)果
        3.4.6 P2重組質(zhì)粒菌液PCR鑒定結(jié)果
        3.4.7 P2重組質(zhì)粒酶切鑒定結(jié)果
    3.5 雙熒光素酶測定結(jié)果
        3.5.1 C_2C_(12)細(xì)胞、PK15細(xì)胞的培養(yǎng)及轉(zhuǎn)染效果
        3.5.2 雙熒光素酶活性檢測結(jié)果
    3.6 P3重組質(zhì)粒酶切鑒定結(jié)果
        3.6.1 pEGFP-C1質(zhì)粒與pMD18-T-α-actin質(zhì)粒的酶切結(jié)果
        3.6.2 pEGFP-C1-α-actin與pMD18-T-FST質(zhì)粒的酶切結(jié)果
        3.6.3 P3重組質(zhì)粒菌液PCR鑒定結(jié)果
        3.6.4 P3重組質(zhì)粒酶切鑒定結(jié)果
    3.7 P4重組質(zhì)粒酶切鑒定結(jié)果
        3.7.1 pEGFP-C1質(zhì)粒與pMD18-T-α-actin質(zhì)粒的酶切結(jié)果
        3.7.2 pEGFP-C1-CMV-α-actin與pMD18-T-FST質(zhì)粒的酶切結(jié)果
        3.7.3 P4重組質(zhì)粒菌液PCR鑒定結(jié)果
        3.7.4 P4重組質(zhì)粒酶切鑒定結(jié)果
    3.8 Real-time PCR的檢測結(jié)果
        3.8.1 從細(xì)胞中提取RNA的質(zhì)量鑒定
        3.8.2 FST基因及相關(guān)基因Real-time PCR的檢測結(jié)果
4 討論
    4.1 載體構(gòu)建
        4.1.1 P1、P2重組質(zhì)粒的構(gòu)建
        4.1.2 P3、P4重組質(zhì)粒的構(gòu)建
    4.2 瞬時(shí)轉(zhuǎn)染后細(xì)胞狀態(tài)的觀察
    4.3 FST與MYOD、MYOG、MSTN、GDF11之間的互作分析
5 結(jié)論
致謝
參考文獻(xiàn)
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
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本文編號：3338577