豬流行性腹瀉是由豬流行性腹瀉病毒引起的豬腸道急性傳染性疾病,以哺乳仔豬的高致病性和高死亡率為特征。近年來,豬流行性腹瀉的大面積流行給中國乃至世界的養(yǎng)豬業(yè)帶來了巨大的損失,引起了各國研究人員的關(guān)注。為了解現(xiàn)今流行的PEDV毒株的分子生物學(xué)特征以及利用原核表達PEDV N蛋白并制備高免血清,本文進行了以下方面的研究:1、PEDV Vero細胞適應(yīng)株全基因組測序和分析:利用33對含有重疊區(qū)域的特異性引物擴增、克隆、測序了由本實驗室分離保存的PEDV野毒CH/JX/01株第50代（CH/JX/01/P50）的全基因組序列,結(jié)果表明該病毒基因組全長為28,054nt,基因結(jié)構(gòu)順序與CV777一致,為5’UTR-ORF1a/b-S-ORF3-E-M-N-3’UTR;與CH/JX/01/P0、CH/JX/01/P5和CH/JX/01/P30比對發(fā)現(xiàn)其核苷酸并沒有發(fā)生插入或者缺失的現(xiàn)象,但存在多個核苷酸位點的突變,突變位置主要集中在ORF1a/b、S、E和M基因,且S基因突變個數(shù)與低代次毒株相比呈現(xiàn)增加趨勢。通過對CH/JX/01/P50的全基因組、S和N基因的遺傳進化分析發(fā)現(xiàn)CH/JX/01的四代都... 

【文章來源】：江西農(nóng)業(yè)大學(xué)江西省

【文章頁數(shù)】：61 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

PEDV模式圖和基因結(jié)構(gòu)

圖 2.1 豬流行性腹瀉病毒 CH/JX/01/P50 株全基因組擴增結(jié)果1-33：為 33 段 PEDV 重疊片段的電泳結(jié)果；34：為 5’RACE 電泳結(jié)果；35：為 3’RACE 電果；M：為 2000bp DNAmarkerFig. 2.1 Amplification result of full-length genome sequence of CH/JX/01/P50Lane 1-33: 33 overlapping fragment of CH/JX/01/P50, Lane 34: 5’RACE products of CH/JX/01

3.1 目的基因擴增結(jié)物；2：陰性對照；Mplification result of PEgene；Lane 2：negati增，得到一條與預(yù) 2 3 4 5 組克隆質(zhì)粒的 PCR 鑒CR 產(chǎn)物；M：DNA


本文編號：3335104