維氏氣單胞菌（Aeromonas veronii,AV）是近年來發(fā)現(xiàn)的一種可引起人及多種水生生物發(fā)病的人-獸-魚共患的病原菌,廣泛存在于自然界水域、土壤和水生動(dòng)物體中。外膜蛋白W（OmpW）作為維氏氣單胞菌的黏附素,是一種潛在的保護(hù)性抗原,可以作為基因工程疫苗候選抗原進(jìn)行試驗(yàn)。乳酸菌是一種公認(rèn)的益生菌,能夠耐受機(jī)體的防御機(jī)制,通過口服方式,進(jìn)入機(jī)體內(nèi)可大量存活,并且與腸道粘膜緊密相連,起到調(diào)節(jié)腸內(nèi)菌群平衡、增強(qiáng)機(jī)體免疫力等益生功能。因此,研制以干酪乳桿菌作為維氏氣單胞菌疫苗抗原呈遞的載體有非常重要的意義。本研究將預(yù)防獸醫(yī)學(xué)研究室保存的維氏氣單胞菌OmpW基因重組干酪乳桿菌分泌表達(dá)型Lc-pPG612-OmpW和細(xì)胞表面表達(dá)型Lc-MCS-OmpW進(jìn)行驗(yàn)證,通過PCR、雙酶切和Western blotting驗(yàn)證OmpW基因在乳桿菌中的表達(dá)情況。結(jié)果顯示,經(jīng)PCR擴(kuò)增出約600 bp的OmpW基因片段,兩種重組乳桿菌表達(dá)的約22 kDa的蛋白均具有良好的反應(yīng)原性。為檢驗(yàn)構(gòu)建的重組菌是否能誘導(dǎo)黏膜和系統(tǒng)免疫應(yīng)答,本試驗(yàn)以鯽魚作為試驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)行免疫學(xué)試驗(yàn)。將Lc-pPG612-OmpW和Lc-... 

【文章來源】：吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)吉林省

【文章頁(yè)數(shù)】：55 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

重組質(zhì)粒鑒定M：DNA標(biāo)準(zhǔn)分子量1-5：Lc-pPG612-OmpW基因PCR產(chǎn)物

15圖 1-2 重組干酪乳桿菌的檢測(cè)結(jié)果（A：Lc-pPG612-OmpW；B：Lc-MCS-OmpW）A：M：DNA 標(biāo)準(zhǔn)分子量；1-2：Lc-pPG612-OmpW 雙酶切產(chǎn)物B：M：DNA 標(biāo)準(zhǔn)分子量；1-2：Lc-MCS-OmpW 雙酶切產(chǎn)物Fig.1-2 The identification of recombinant Lc.casei(A: Lc-pPG612-OmpW; B: Lc-MCS-OmpW)A: M: DL5000 DNA Marker; 1-2: plasmid Lc-pPG612-OmpWB: M: DL5000 DNA Marker; 1-2: plasmid Lc-MCS-OmpW

.2.2 蛋白水平驗(yàn)證將重組干酪乳桿菌 Lc-MCS-OmpW 和 Lc-pPG612-OmpW 誘導(dǎo)表達(dá)后，利抗維氏氣單胞菌 TH0426 株血清作為一抗，山羊抗小鼠 IgG 作為二抗，進(jìn)estern blotting 鑒定，Lc-pPG612 進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)作為對(duì)照，在 22kDa 處出現(xiàn)印小與預(yù)期相符，表明重組干酪乳桿菌能表達(dá)目的蛋白。而 Lc-pPG612 空載明顯條帶，表明抗維氏氣單胞菌血清能識(shí)別 OmpW 蛋白，結(jié)果見圖 1-3。


本文編號(hào)：3326492