豬血凝性腦脊髓炎病毒（Porcine Hemagglutinating encephalomyelitis virus,PHEV）屬于冠狀病毒科β-冠狀病毒屬成員，為不分段的單股正鏈RNA病毒，可引起仔豬發(fā)生豬血凝性腦脊髓炎（Porcine Hemagglutinating encephalomyelitis，PHE）。PHE是一種急性、高度接觸性傳染病臨床上，以仔豬嘔吐、衰竭、下痢或/和明顯的神經癥狀為主要特征，死亡率高達20%-100%。該病一旦暴發(fā)流行，其危害十分嚴重。microRNA（miRNA）是發(fā)現(xiàn)于真核生物中的一類非編碼小分子單鏈RNA，在細胞的基因表達調控中發(fā)揮重要的作用。而在病毒感染細胞過程中miRNA的表達變化往往與病毒的致病性相關。因此，miRNA的發(fā)現(xiàn)為研究PHEV的致病機制提供了新的研究思路也為PHE的防控提供了新的方向。近年來，小鼠作為最佳動物模型已經廣泛應用于PHEV致病機制的研究。而PHEV具有嗜神經性，能夠侵害小鼠的中樞神經系統(tǒng)，對小鼠大腦皮質造成損傷。另一方面，大腦皮質是一個富含miRNA的器官。因此，在PHEV侵害大腦皮質過程中許多基因表達變化的同... 

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PHEV感染后第5d小鼠大腦皮質區(qū)H&E染色觀察Fig1.2.Histopathologicalexaminationintheregionofcerebralcortexin5dpi.1.2.3PHEV感染小鼠后不同時間段大腦皮質區(qū)病毒的分布和含量的變化

腦皮質組織區(qū)能檢測到少量病毒抗原的分布（呈現(xiàn)的綠色熒光為病毒抗原被FITC標記后的陽性信號）。到感染后第5d時檢測到病毒表達的抗原蛋白逐漸增加，并且廣泛分布于感染小鼠的大腦皮質組織（圖1.3）。此外，提取小鼠大腦皮質的總RNA，應用Real-time PCR相對定量的方法分析病毒基因組RNA含量的變化，結果表明：PHEV感染小鼠第3dPHEV基因組RNA相對表達量變化顯著（P<0.05），而到第4d和第5d病毒基因組RNA表達量升高極顯著(P<0.01)（圖1.4和圖1.5）。

5 PHEV感染小鼠后在大腦皮質區(qū)不同時間段病毒基因組RNA的變uantities of PHEV genomic RNA at different time post infection in mice cerebraHEV感染小鼠不同時間段大腦皮質區(qū)細胞因子TNF-a和IFN-r含量得到小鼠大腦皮質后，加入PBS，冰上勻漿，4 ℃ 900g離心10min10%的勻漿液，并應用ELISA方法檢測大腦皮質組織細胞因子的：與對照相比，PHEV感染后第第3d小鼠的細胞因子TNF-a變化不-r的表達量顯著升高（P<0.05）；與對照相比，PHEV感染后第5dTNF-a和IFN-r均顯著升高（P<0.05）（圖1.6）。結果表明：PHEV腦皮質區(qū)出現(xiàn)了炎癥反應。


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