豬繁殖與呼吸綜合征（PRRS）是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）引起的一種以懷孕母豬流產(chǎn)和不同年齡段豬的呼吸道疾病為臨床特征的病毒性傳染病。PRRSV具有逃逸宿主體液免疫應(yīng)答機(jī)制等特征,導(dǎo)致現(xiàn)階段商品化的疫苗不能給豬群提供完全的保護(hù)作用,且目前尚未得知有效的治療方法,該病給我國養(yǎng)豬業(yè)帶來巨大的經(jīng)濟(jì)損失。前期研究中,本實驗室將PRRSV非結(jié)構(gòu)蛋白Nsp9特異性納米抗體Nb6基因通過（G₄S）₃ Linker與細(xì)胞穿膜肽TAT基因融合,克隆至pET21b載體,成功構(gòu)建pET21b-TAT-Nb6表達(dá)載體。原核表達(dá)獲得的TAT-Nb6重組蛋白具有與Nsp9重組蛋白相互作用的活性,并且能夠進(jìn)入MARC-145細(xì)胞和原代細(xì)胞PAM中,可以抑制多株P(guān)RRSV毒株（包括基因1型（GZ11-G1）與2型（SD16、JX-A1、GD-HD、VR-2332））在以上兩種細(xì)胞中的復(fù)制（Wang et al.2019）。因此,TAT-Nb6具有開發(fā)為新型抗PRRSV納米抗體藥物的潛力�；谝陨媳尘�,本研究通過對TAT-Nb6誘導(dǎo)表達(dá)溫度、IPTG添加量和誘導(dǎo)表... 

【文章來源】：西北農(nóng)林科技大學(xué)陜西省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：61 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
文獻(xiàn)綜述
    第一章 豬繁殖與呼吸綜合征病的研究進(jìn)展
        1.1 豬繁殖與呼吸綜合征病簡介
        1.2 豬繁殖與呼吸綜合征病毒簡介
        1.3 豬繁殖與呼吸綜合征病臨床癥狀
        1.4 豬繁殖與呼吸綜合征病診斷方法
            1.4.1 臨床診斷
            1.4.2 病毒分離與鑒定
            1.4.3 免疫學(xué)診斷
            1.4.4 分子生物學(xué)診斷
        1.5 豬繁殖與呼吸綜合征病防控現(xiàn)狀
    第二章 納米抗體的研究進(jìn)展
        2.1 納米抗體結(jié)構(gòu)特征
        2.2 納米抗體的特點
        2.3 納米抗體的應(yīng)用
            2.3.1 納米抗體作為研究工具
            2.3.2 納米抗體在檢測中的應(yīng)用
            2.3.3 納米抗體在疾病治療中應(yīng)用
    第三章 細(xì)胞穿模肽的研究進(jìn)展
本研究的目的與意義
試驗研究
    第四章 TAT-Nb6 重組蛋白表達(dá)條件優(yōu)化及大量制備
        4.1 材料
            4.1.1 菌液
            4.1.2 主要耗材與試劑
        4.2 方法
            4.2.1 TAT-Nb6 重組蛋白表達(dá)條件的優(yōu)化
            4.2.2 TAT-Nb6 重組蛋白大量制備
            4.2.3 TAT-Nb6 重組蛋白復(fù)性及濃縮
            4.2.4 TAT-Nb6 重組蛋白活性鑒定
            4.2.5 TAT-Nb6 重組蛋白在豬組織中分布的研究
        4.3 結(jié)果
            4.3.1 TAT-Nb6 重組蛋白表達(dá)條件的優(yōu)化
            4.3.2 TAT-Nb6 重組蛋白的純化
            4.3.3 TAT-Nb6 重組蛋白的復(fù)性與濃縮
            4.3.4 TAT-Nb6 重組蛋白活性鑒定
            4.3.5 TAT-Nb6 重組蛋白在豬組織中分布的研究
        4.4 討論
        4.5 小結(jié)
    第五章 TAT-Nb6 在體內(nèi)抗PRRSV感染作用的驗證
        5.1 材料
            5.1.1 病毒和實驗動物
            5.1.2 主要耗材與試劑
        5.2 方法
            5.2.1 TAT-Nb6 重組蛋白內(nèi)毒素檢測
            5.2.2 實驗方案
            5.2.3 檢測指標(biāo)
        5.3 結(jié)果
            5.3.1 TAT-Nb6 蛋白內(nèi)毒素檢測
            5.3.2 臨床表現(xiàn)及體溫測量
            5.3.3 PRRSV病毒血癥
            5.3.4 PRRSV抗體水平
        5.4 討論
        5.5 小結(jié)
結(jié)論
附錄 A 主要實驗儀器
附錄 B 主要試劑配制
參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡歷


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
[1]PRRSV-IPMA抗體檢測試劑盒的研制及應(yīng)用[D]. 譚斌.新疆農(nóng)業(yè)大學(xué) 2006



本文編號：3307809