血吸蟲病是由血吸蟲感染引起的、危害嚴(yán)重的人畜共患寄生蟲病,在78個(gè)熱帶和亞熱帶國家或地區(qū)流行。在我國流行的是日本血吸蟲病,幾十年來我國血吸蟲病防控取得舉世矚目的成就,大多數(shù)地區(qū)人、畜血吸蟲病的流行已呈現(xiàn)低流行性和低感染特點(diǎn),傳統(tǒng)的病原學(xué)診斷逐漸無法滿足現(xiàn)場需求。本研究的目的是建立一種敏感性高、特異性強(qiáng)、便于判斷的日本血吸蟲病核酸診斷方法。在前期研究及生物信息學(xué)分析的基礎(chǔ)上,本文選擇G01、F11、E12、H12、G1/3、G7-1、G7-2和G7-3作為候選基因,分別設(shè)計(jì)引物并以日本血吸蟲蟲體基因組DNA、BALB/c小鼠基因組DNA和新西蘭大白兔基因組DNA為模板進(jìn)行基因擴(kuò)增,挑選出能特異性從日本血吸蟲蟲體基因組DNA擴(kuò)增,但不能從BALB/c小鼠和新西蘭大白兔基因組DNA擴(kuò)增出目的片段的基因。以G01作為診斷靶基因,三個(gè)不同感染劑量（10條、40條、100條）的小鼠各10只,在感染后42d提取血漿提核酸為模板,均可擴(kuò)增得到G01片段。同時(shí)以弓形蟲、大片形吸蟲、前后盤吸蟲、住肉孢子蟲、旋毛蟲、棘球絳蟲的蟲體基因組DNA為模板對(duì)G01進(jìn)行擴(kuò)增,均未擴(kuò)增出目的片段,表明G01基因是一種有... 

【文章來源】：中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京市

【文章頁數(shù)】：58 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

以蟲體基因組DNA為模板對(duì)候選基因的篩選結(jié)果

圖 2-1 以蟲體基因組 DNA 為模板對(duì)候選基因的篩選結(jié)果 Fig. 2-1 Screening results of candidate genes by using S. japonicum DNA as template 1 基因 G01；2 基因 F11；3 基因 E12；4 基因 H12；5 基因 G1/3；6 基因 G7-1；7 基因 G7-2；8 基因 G7-3；Y 無引物體系；M DNA分子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)(DL 500) 1 Gene G01; 2 Gene F11; 3 Gene E12; 4 Gene H12; 5 Gene G1/3; 6 Gene G7-1; 7 Gene G7-2; 8 Gene G7-3; Y No primers control; M DL 500 DNA Marker

中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院碩士學(xué)位論文第二章日本血吸蟲病核酸診斷目的基因的篩選16圖2-3候選基因G01的評(píng)估結(jié)果Fig.2-3EvaluationofcandidategeneG011-2小鼠陰性血漿DNA；3-4組1小鼠血漿DNA；5-6組2小鼠血漿DNA；7-8組3鼠血漿DNA；P日本血吸蟲蟲體基因組；Y無引物體系；B無模板體系；MDNA分子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)(DL500)1-2Negativecontrol;3-4DNAfrommiceinGroup1;5-6DNAfrommiceinGroup2;7-8DNAfrommiceinGroup3;PPositivecontrol;YNoprimerscontrol;BNotemplatecontrol;MDL500DNAMarker圖2-4交叉反應(yīng)性試驗(yàn)結(jié)果Fig.2-4Resultsofcrossreactivitytest1弓形蟲DNA；2大片形吸蟲DNA；3前后盤吸蟲DNA；4住肉孢子蟲DNA；5旋毛蟲DNA；6棘球絳蟲DNA；7日本血吸蟲DNA；MDNA分子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)(DL500)1DNAofToxoplasmaGondii;2DNAofFasciolagigantica;3DNAofParamphistomum;4DNAofSarcocystiscruzi;5DNAofTrichina;6DNAofEchinococcusmultilocularis;7DNAofSchistosomajaponicum;MDL500DNAMarker2.5討論血吸蟲病的診斷是血吸蟲病防治工作的重要環(huán)節(jié)。近年來，隨著我國采取血吸蟲病有效的防治措施，日本血吸蟲病在人群中的感染率和感染強(qiáng)度均顯著降低(李林瀚等,2019)。但是，目前常用的檢測血吸蟲病的病原學(xué)診斷和免疫學(xué)診斷方法的敏感性和實(shí)效性受到了一定的限制(孫成松等,2013)。然而，分子生物學(xué)技術(shù)因其高特異性和高靈敏性等特點(diǎn)，極大地促進(jìn)了低感染強(qiáng)度下血吸蟲病的檢出率(張燕等,2017)。目前相關(guān)分子檢測技術(shù)除了檢測日本血吸蟲蟲體核酸和蟲卵核酸外，還有檢測水體中的尾蚴核酸，檢測陽性釘螺中的胞蚴核酸等，因此靶基因的選擇也多

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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