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O型口蹄疫病毒血清抗體競爭ELISA檢測方法的建立及驗(yàn)證

發(fā)布時(shí)間:2021-07-13 02:12
  目的建立O型口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)血清抗體的競爭ELISA檢測方法,并進(jìn)行驗(yàn)證。方法采用O型FMDV病毒樣顆粒(virus-like particle,VLP)作為包被抗原,建立用于檢測FMDV血清抗體的競爭ELISA方法。對方法的抗原包被濃度(0. 1、0. 2、0. 3、0. 4、0. 5、0. 6、0. 7、0. 8、0. 9、1. 0μg/mL)、抗原包被溫度及時(shí)間(4℃過夜、37℃1 h、37℃1.5 h、37℃2 h、37℃2. 5 h、37℃3 h)、血清稀釋度(1∶2、1∶4、1∶8、1∶16稀釋)、HRP-IgG稀釋度(1∶10 000~1∶20 000稀釋)、封閉液種類(不封閉、1%BSA封閉、2%BSA封閉、5%脫脂乳封閉)、封閉液作用時(shí)間(30、60、90、120 min)、血清與HRP-IgG作用時(shí)間(30、60、90、120、150 min)、底物TMB作用時(shí)間(10、15、20、25、30 min)進(jìn)行優(yōu)化。同時(shí)驗(yàn)證方法的交叉反應(yīng)、特異性及敏感性、精密性。采用建立的方法及O型FMDV抗體液相阻斷EL... 

【文章來源】:中國生物制品學(xué)雜志. 2020,33(04)CSCD

【文章頁數(shù)】:7 頁

【部分圖文】:

O型口蹄疫病毒血清抗體競爭ELISA檢測方法的建立及驗(yàn)證


O型FMDV VLP的SDS-PAGE分析

蛋白,方法


O型FMDV VLP蛋白的Western blot鑒定

曲線,曲線,血清,交叉反應(yīng)


21份不同豬病的陽性血清中,除3份O型FMD陽性血清的抑制率>50%,為陽性外,其他血清樣品抑制率均<50%,為陰性,該方法無交叉反應(yīng)。2.4.2 特異性和敏感性

【參考文獻(xiàn)】:
期刊論文
[1]ELISA在口蹄疫監(jiān)測中的應(yīng)用進(jìn)展[J]. 厙大亮,陳前鋒,武革利,厲少漢.  中國獸藥雜志. 2014(01)
[2]口蹄疫病毒分子生物學(xué)檢測方法研究進(jìn)展[J]. 孫芳芳,董英,薛強(qiáng),鄒明強(qiáng).  中國畜牧獸醫(yī). 2013(06)
[3]口蹄疫診斷技術(shù)的研究進(jìn)展[J]. 劉明,徐娜,李志勇,柳紀(jì)省.  生物技術(shù)通報(bào). 2010(05)



本文編號(hào):3281124

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