結核分枝桿菌（Mycobacterium tuberculosis,Mtb）因呈現(xiàn)“休眠”狀態(tài)而在宿主體內長期滯留感染,表明Mtb利用轉錄調控蛋白調控目的基因的表達以快速適應環(huán)境的變化,使其能夠在宿主體內存活多年甚至更久。因此,闡明結核分枝桿菌轉錄調控蛋白的調控機制,從而為研發(fā)治療持留感染的新型藥物奠定基礎。Rv3557c（KstR2）隸屬于TetR家族轉錄調控蛋白,目前對其研究的報道較少,其直接作用的靶點及小分子對調控的影響機制尚不清楚。因此,研究Rv3557c（KstR2）轉錄調控蛋白的調控機制具有重要意義。本研究以Mtb H37Rv基因組DNA為模板,應用PCR方法擴增KstR2基因后構建了重組表達載體pET-22b-KstR2,經(jīng)轉化、誘導后得到重組蛋白KstR2,以此純化蛋白開展下列研究工作:通過凝膠遷移試驗（EMSA）和染色質免疫沉淀（ChIP）試驗測定KstR2與靶基因的結合情況,結果顯示KstR2與rv2549c啟動子在體外與體內均結合,表明rv2549c基因的轉錄受KstR2的調控,且該蛋白與位于rv2549c轉錄起始位點上游155bp處的12個堿基序列結合,而Kst... 

【文章來源】：黑龍江八一農墾大學黑龍江省

【文章頁數(shù)】：85 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

細菌中啟動子DNA和RNA的結構[11]

TetR家族蛋白Rv3557c（KstR2）調控結核分枝桿菌基因轉錄的機制研究4圖1-2細菌中啟動子的不同激活機制Fig.1-2DifferentactivationmechanismsforsimplepromotersinBacteria（a）Ⅰ類激活。激活劑結合上游位點并與RNA聚合酶的αCTD相互作用將聚合酶集中到啟動子；（b）Ⅱ類激活。激活劑結合到靠近–35元件的靶標，并且激活劑與σ70的結構域4相互作用；（c）通過構象變化激活。激活劑（以藍色顯示）在啟動子元件處或附近結合，并重新排列–10和–35元件，因此RNA聚合酶全酶可與啟動子結合。(a)ClassⅠactivation.TheactivatorbindstheupstreamsiteandinteractswiththeαCTDofRNApolymerasetorecruitthepolymerasetothepromoter.(b)ClassⅡactivation.Theactivatorbindstoatargetthatisneartothe–35element,andtheactivatorinteractswithdomain4ofσ70.(c)Activationthroughconformationchanges.Theactivator(showninblue)bindsat,ornearto,thepromoterelementsandrearrangesthe–10andthe–35elementssothattheRNApolymeraseholoenzymecanbindtothepromoter.

文獻綜述5圖1-3細菌的抑制機制Fig.1-3RepressionmechanismsinBacteria（a）通過位阻進行抑制。阻遏物與核心啟動子區(qū)域結合，阻斷RNAP與該區(qū)域的結合；（b）循環(huán)抑制。阻遏物與遠端位點結合并通過環(huán)相互作用，從而改變啟動子的結構并阻止RNAP結合；（c）通過調節(jié)激活蛋白來抑制。阻遏物與激活劑相互作用，減弱或消除其刺激作用。(a)Repressionbysterichindrance.TherepressorbindstothecorepromoterregiontoblockRNAPbindingtothisregion.(b)Repressionbylooping.Repressorsbindtodistalsitesandinteractbylooping,therebychangingthepromoterstructureandpreventingRNAPbinding.(c)Repressionbythemodulationofanactivatorprotein.Therepressorinteractswithanactivatorandweakensorabolishesitsstimulatingeffect.1.3結核分枝桿菌的轉錄調控網(wǎng)絡Mtb基因組編碼200多個轉錄調控蛋白，這些蛋白在細菌的復制、轉錄、翻譯、轉運等多個方面起到調控作用[7]。基因組編碼13個σ因子、11個雙組份系統(tǒng)、8個應答調節(jié)元件、11個蛋白激酶和超過140個公認的轉錄調節(jié)因子[20]。部分轉錄因子的功能已經(jīng)被鑒定，這些轉錄因子多與環(huán)境壓力有關，如冷激、熱激、缺氧、鐵饑餓、表面壓力等因素[21-26]。Jacques等人總結了前人已經(jīng)研究的轉錄因子和靶基因相互作用的結果，并將這些結果構建


本文編號：3277303