胸膜肺炎放線桿菌（Actinobacillus pleuropneumoniae, APP）是屬于巴氏桿菌科放線桿菌屬的革蘭氏陰性球桿菌,能引起豬的傳染性胸膜肺炎。該病的臨床特征主要表現(xiàn)為肺壞死、出血和胸膜肺炎,具有高度接觸傳染性和致死性。目前,除了少部分尚未定型的菌株外,APP主要包括15種血清型,預(yù)防和控制本病依然主要使用滅活疫苗,由于型之間的交叉保護(hù)力不好,導(dǎo)致滅活苗的保護(hù)效果十分有限。本試驗(yàn)主要是對(duì)胸膜肺炎放線桿菌的omlA、plpA、lolB、omp2、ompAe及plpB六個(gè)外膜蛋白進(jìn)行了克隆及原核表達(dá),并研究了它們的免疫原性。從湖南送檢的疑似胸膜肺炎的豬病料中分離到一株APP,并對(duì)其做了PCR鑒定、生化試驗(yàn)、藥敏試驗(yàn)及動(dòng)物感染試驗(yàn),確定該株APP為血清1型。根據(jù)GenBank中發(fā)表的胸膜肺炎放線桿菌的全基因序列（Accession:CP001091）,利用DNAstar軟件挑選出6個(gè)外膜蛋白基因設(shè)計(jì)引物,其中ompAe基因引物中設(shè)有BamH Ⅰ和Sal Ⅰ兩個(gè)酶切位點(diǎn),其它五個(gè)蛋白基因均含有EcoR Ⅰ和Sal Ⅰ兩個(gè)酶切位點(diǎn)。以APP全菌為模板對(duì)各目的基因進(jìn)行PCR擴(kuò)增... 

【文章來(lái)源】：湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)湖南省

【文章頁(yè)數(shù)】：61 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
目錄
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1 病原學(xué)特性
    2 臨床特征及病理變化
    3 主要毒力因子
    4 APP的診斷方法研究
    5 免疫預(yù)防
    6 展望
第二章 豬胸膜肺炎放線桿菌的分離與鑒定及其對(duì)小鼠致病性試驗(yàn)
    1 材料與方法
        1.1 材料
            1.1.1 病料來(lái)源
            1.1.2 主要培養(yǎng)基
            1.1.3 主要試劑
            1.1.4 試驗(yàn)動(dòng)物
        1.2 方法
            1.2.1 細(xì)菌的分離
            1.2.2 形態(tài)學(xué)觀察
            1.2.3 V因子(NAD)依賴試驗(yàn)
            1.2.4 生化試驗(yàn)
            1.2.5 藥敏試驗(yàn)
            1.2.6 PCR鑒定
            1.2.7 序列測(cè)定
            1.2.8 動(dòng)物感染試驗(yàn)
    2 結(jié)果與分析
        2.1 細(xì)菌分離及培養(yǎng)特性
        2.2 生化試驗(yàn)
        2.3 藥敏試驗(yàn)
        2.4 PCR鑒定及序列分析
        2.5 動(dòng)物感染試驗(yàn)
            2.5.1 臨床癥狀與剖檢病理變化
            2.5.2 病原菌的分離及鑒定
    3 討論
    4 小結(jié)
第三章 豬胸膜肺炎放線桿菌lolB、plpA、plpB、omp2、omlA和ompAe基因的克隆表達(dá)及其免疫原性分析
    1 材料和方法
        1.1 材料
            1.1.1 菌種和載體
            1.1.2 主要試劑
            1.1.3 引物合成
        1.2 方法
            1.2.1 PCR模板的制備
            1.2.2 目的基因的PCR擴(kuò)增
            1.2.3 融合表達(dá)載體的構(gòu)建及連接產(chǎn)物的轉(zhuǎn)化
            1.2.4 陽(yáng)性轉(zhuǎn)化子的鑒定及重組質(zhì)粒的構(gòu)建與鑒定
            1.2.5 重組蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)及鑒定
            1.2.6 重組蛋白的大量誘導(dǎo)及純化
            1.2.7 重組蛋白的Western blot鑒定
            1.2.8 昆明小鼠的免疫試驗(yàn)
    2 結(jié)果與分析
        2.1 APP的6個(gè)目的基因的擴(kuò)增、序列分析及酶切鑒定
        2.2 重組蛋白的SDS-PAGE鑒定
        2.3 六個(gè)重組蛋白的純化及Western blot鑒定
        2.4 免疫攻毒保護(hù)試驗(yàn)
    3 討論
    4 小結(jié)
第四章 LTB-omp2、LTB-omlA的克隆表達(dá)及與omlA及omp2的免疫原性分析
    1 材料和方法
        1.1 材料
        1.2 方法
            1.2.1 PCR擴(kuò)增
            1.2.2 融合表達(dá)載體的構(gòu)建及鑒定
            1.2.3 融合蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)、鑒定及純化
            1.2.4 重組蛋白的主動(dòng)免疫保護(hù)性試驗(yàn)
    2 結(jié)果與分析
        2.1 LTB-omp2及LTB-omlA的陽(yáng)性鑒定、序列測(cè)定及分析
        2.2 融合蛋白的SDS-PAGE鑒定
        2.3 昆明小鼠免疫攻毒保護(hù)試驗(yàn)
    3 討論
    4 小結(jié)
總結(jié)
參考文獻(xiàn)
符號(hào)說(shuō)明
致謝
個(gè)人簡(jiǎn)歷


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
[1]胸膜肺炎放線桿菌血清學(xué)分型和基因分型的研究[D]. 陳凡.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2004



本文編號(hào)：3270833