細(xì)菌胞外囊泡（outer membrane vesicles,OMVs）是在細(xì)菌生長(zhǎng)過(guò)程中從細(xì)胞膜分泌到細(xì)胞外空間的具有脂質(zhì)雙層結(jié)構(gòu)的納米級(jí)囊泡,它含有細(xì)菌細(xì)胞膜蛋白,脂質(zhì)和核酸等多種生物活性分子,在細(xì)胞間傳遞信號(hào),具有多種生理功能。如:介導(dǎo)細(xì)菌-宿主相互作用,呈遞細(xì)菌抗原,調(diào)節(jié)宿主免疫系統(tǒng)功能。隨著對(duì)OMV生物學(xué)特性和功能研究的不斷深入,一些共生細(xì)菌和益生菌是否能通過(guò)分泌OMVs途徑誘導(dǎo)宿主免疫系統(tǒng)的發(fā)育已引起學(xué)術(shù)界的廣泛關(guān)注。本試驗(yàn)分離純化枯草芽孢桿菌168菌株（B.subtilis 168）細(xì)胞外囊泡,以小鼠巨噬細(xì)胞為模型,研究B.subtilis 168細(xì)胞外囊泡（BS-OMV）對(duì)巨噬細(xì)胞活力的影響。并且構(gòu)建綠色熒光蛋白重組B subtilis 168,檢測(cè)細(xì)胞外囊泡攜帶重組蛋白的能力。主要試驗(yàn)結(jié)果如下:（1）首先采用差速離心法從B.subtilis 168培養(yǎng)液上清中富集BS-OMVs,隨后采用密度梯度離心法進(jìn)行純化得到純化BS-OMVs。掃描電鏡檢測(cè)結(jié)果顯示:BS-OMVs的形態(tài)大小不一,視野清晰且無(wú)雜質(zhì),呈圓形或橢圓形,直徑平均約為100 nm左右,范圍在50-200 n... 

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

掃igure1-1Ob掃描電鏡下細(xì)servationofB細(xì)菌胞外囊泡BS-OMVsus形態(tài)

圖 2-2 B. subtilis 168 的生長(zhǎng)曲線Fig. 2-2 Growth curve of B. subtilis 168態(tài)檢測(cè)及粒徑分析法從 B. subtilis 168 培養(yǎng)液上清中富集、經(jīng)過(guò)密度梯密度層 BS-OMVs 的濃度，計(jì)算各層 BS-OMVs 相圖2-3)顯示BS-OMVs主要集中在F3-F5，所以選擇離心富集得到純化的 BS-OMVs。

采用差速離心法從 B. subtilis 168 培養(yǎng)液上清中富集、經(jīng)過(guò)密度梯度離心后采用納米顆粒粒度儀測(cè)定各密度層 BS-OMVs 的濃度，計(jì)算各層 BS-OMVs 相對(duì)豐度，選取合適的濃度區(qū)間，結(jié)果(圖2-3)顯示BS-OMVs主要集中在F3-F5，所以選擇濃度梯度在20%-30%的密度層進(jìn)行超速離心富集得到純化的 BS-OMVs。圖 2-3 梯度密度離心法各密度層中 BS-OMVs 相對(duì)豐度F1-F10 分別是 10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%不同濃度梯度的 OptiPrepTM Density Gradient Medium 溶液。Fig. 2-3 Relative abundance of BS-OMV in different dsensity layerNote: F1-F10 are 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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碩士論文
[1]枯草芽孢桿菌和酵母細(xì)胞壁多糖對(duì)哺乳和斷奶仔豬生產(chǎn)性能的影響研究[D]. 李興華.廣西大學(xué) 2013



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