發(fā)布時(shí)間：2021-07-01 19:04

　　過氧化物酶體增殖物激活受體（Peroxisome Proliferator-activated Receptor gamma,PPARG）是目前發(fā)現(xiàn)在脂肪組織中調(diào)控脂肪酸代謝的核心轉(zhuǎn)錄因子,它能調(diào)控脂肪酸代謝基因網(wǎng)絡(luò),影響甘油三酯的合成,是脂肪細(xì)胞脂肪酸沉積的關(guān)鍵因子。但目前山羊泌乳過程中PPARG對(duì)乳腺脂肪酸代謝的機(jī)理研究卻比較稀少。本研究以奶山羊乳腺上皮細(xì)胞為材料,利用5種不同的長鏈脂肪酸（C16,C18,CLA,DHA和EPA）,PPARG的激動(dòng)劑（ROSI）和抑制劑（GW）處理山羊乳腺上皮細(xì)胞,以及結(jié)合超表達(dá)PPARG具體分析了PPARG對(duì)脂肪酸代謝相關(guān)基因的表達(dá)調(diào)控,同時(shí)分析了PPARG的靶基因Adipo R1和LPL基因在山羊乳腺上皮細(xì)胞中的功能,獲得以下結(jié)果:1.利用50μM GW（PPARG的抑制劑）處理山羊乳腺上皮細(xì)胞后發(fā)現(xiàn),Adipo R1,LPIN1,PPARG,LXRA,LPL,ACSL1,FABP3和FABP4等基因m RNA表達(dá)下調(diào);利用50μM ROSI（PPARG的激動(dòng)劑）處理乳腺上皮細(xì)胞后發(fā)現(xiàn),Adipo R1,FADS1,AGPAT6,LPIN1,S... 

【文章來源】：西北農(nóng)林科技大學(xué)陜西省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：96 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
英文摘要
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 乳脂的特點(diǎn)
    1.2 山羊乳脂和奶牛的區(qū)別
    1.3 山羊乳脂肪酸組成
    1.4 長鏈脂肪酸的研究進(jìn)展
        1.4.1 飽和脂肪酸的研究進(jìn)展
        1.4.2 不飽和脂肪酸的研究進(jìn)展
    1.5 PPARG的研究進(jìn)展
        1.5.1 PPARG能夠控制脂肪生成和脂代謝
        1.5.2 PPARG能夠調(diào)控脂代謝基因的網(wǎng)絡(luò)通路
    1.6 其它轉(zhuǎn)錄因子的研究進(jìn)展
        1.6.1 LXRA在脂質(zhì)代謝中的作用
        1.6.2 SREBF1在脂質(zhì)代謝中的作用
    1.7 ADIPOR1和LPL基因的研究進(jìn)展
    1.8 本研究的目的與意義
第二章 長鏈脂肪酸通過PPARG對(duì)脂代謝相關(guān)基因表達(dá)的影響
    2.1 材料與方法
        2.1.1 主要試劑
        2.1.2 主要儀器
        2.1.3 長鏈脂肪酸、ROSI和GW9662以及GG和T09的制備
        2.1.4 細(xì)胞培養(yǎng)與處理
        2.1.5 RNA提取和質(zhì)量檢測
        2.1.6 cDNA第一鏈的合成
        2.1.7 引物設(shè)計(jì)和RT-qPCR
        2.1.8 數(shù)據(jù)處理
    2.2 結(jié)果
        2.2.1 長鏈脂肪酸通過PPARG對(duì)脂肪酸代謝相關(guān)基因的mRNA表達(dá)影響
        2.2.2 LXRA對(duì)脂肪酸代謝相關(guān)基因的影響
    2.3 討論
        2.3.1 PPARG調(diào)控乳腺脂肪生成相關(guān)基因網(wǎng)絡(luò)
        2.3.2 長鏈脂肪酸通過PPARG調(diào)控乳腺脂肪生成相關(guān)基因
    2.4 本章小結(jié)
第三章 PPARG在山羊乳腺上皮細(xì)胞中的過表達(dá)研究及其靶基因的篩選
    3.1 材料與方法
        3.1.1 主要試劑
        3.1.2 主要儀器
        3.1.3 重組腺病毒載體構(gòu)建
        3.1.4 超表達(dá)病毒Ad-PPARG包裝、擴(kuò)增
        3.1.5 細(xì)胞培養(yǎng)與處理
        3.1.6 RNA提取和質(zhì)量檢測
        3.1.7 cDNA第一鏈的合成
        3.1.8 引物設(shè)計(jì)和RT-qPCR
        3.1.9 數(shù)據(jù)處理
    3.2 結(jié)果
        3.2.1 超表達(dá)PPARG影響了脂肪酸合成，去飽和化，三酰甘油合成以及脂滴形成相關(guān)基因的mRNA表達(dá)
        3.2.2 超表達(dá)PPARG影響了生物鐘相關(guān)基因的mRNA表達(dá)
        3.2.3 超表達(dá)PPARG影響了轉(zhuǎn)錄調(diào)控相關(guān)基因的mRNA表達(dá)
    3.3 討論
        3.3.1 超表達(dá)PPARG影響了脂肪酸合成，去飽和化，三酰甘油合成以及脂滴形成相關(guān)基因的mRNA表達(dá)
        3.3.2 超表達(dá)PPARG對(duì)生物鐘相關(guān)基因mRNA表達(dá)的影響
        3.3.3 超表達(dá)PPARG對(duì)轉(zhuǎn)錄調(diào)控相關(guān)基因mRNA表達(dá)的影響
        3.3.4 PPARG的下游靶基因AdipoR1和LPL的確定
    3.4 本章小結(jié)
第四章 ADIPOR1在乳腺上皮細(xì)胞上的表達(dá)調(diào)控研究
    4.1 材料和方法
        4.1.1 實(shí)驗(yàn)樣品
        4.1.2 主要試劑
        4.1.3 引物設(shè)計(jì)
        4.1.4 總RNA提取，cDNA合成以及實(shí)時(shí)定量
        4.1.5 AdipoR1基因cDNA全長的克隆
        4.1.6 AdipoR1的生物信息學(xué)分析
        4.1.7 細(xì)胞的處理及siRNA的設(shè)計(jì)
        4.1.8 AdipoR1在各組織中的表達(dá)量
        4.1.9 數(shù)據(jù)處理與分析
    4.2 結(jié)果
        4.2.1 山羊AdipoR1基因序列全長的克隆
        4.2.2 山羊AdipoR1的同源性分析
        4.2.3 山羊AdipoR1的結(jié)構(gòu)分析
        4.2.4 AdipoR1在不同組織和泌乳時(shí)期的表達(dá)分析
        4.2.5 奶山羊乳腺上皮細(xì)胞中添加胰島素和催乳素對(duì)AdipoR1表達(dá)的影響
        4.2.6 AdipoR1干擾后對(duì)奶山羊乳腺上皮細(xì)胞脂肪酸代謝基因的影響
    4.3 討論
        4.3.1 AdipoR1基因在不同組織和泌乳時(shí)期的表達(dá)
        4.3.2 胰島素和催乳素對(duì)AdipoR1基因的調(diào)控
        4.3.3 AdipoR1干擾對(duì)脂肪酸代謝相關(guān)基因表達(dá)的影響
    4.4 本章小結(jié)
第五章 LPL的組織表達(dá)及在山羊乳腺上皮細(xì)胞中對(duì)脂肪酸合成相關(guān)基因的影響
    5.1 材料和方法
        5.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和樣品采集
        5.1.2 主要試劑
        5.1.3 LPL基因的克隆，序列分析和組織表達(dá)
        5.1.4 表達(dá)和統(tǒng)計(jì)分析
        5.1.5 Orlistat和LPL干擾在山羊乳腺上皮細(xì)胞中對(duì)乳脂合成相關(guān)基因的影響
    5.2 結(jié)果
        5.2.1 LPL的克隆和序列分析
        5.2.2 LPL蛋白系統(tǒng)進(jìn)化樹的構(gòu)建
        5.2.3 LPL基因在10個(gè)組織和兩個(gè)泌乳階段的mRNA表達(dá)
        5.2.4 LPL干擾和Orlistat處理在山羊乳腺上皮細(xì)胞中影響了乳脂合成相關(guān)基因的表達(dá)
    5.3 討論
        5.3.1 LPL基因在10個(gè)不同組織和兩個(gè)不同泌乳時(shí)期的表達(dá)
        5.3.2 在山羊乳腺上皮細(xì)胞中干擾LPL基因和添加Orlistat對(duì)乳脂合成相關(guān)基因的影響
    5.4 本章小結(jié)
結(jié)論
本研究的創(chuàng)新點(diǎn)
存在問題及展望
參考文獻(xiàn)
附錄
縮略詞表
致謝
作者簡介


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]西農(nóng)薩能羊胰島素誘導(dǎo)基因2（INSIG2）的克隆及組織表達(dá)分析[J]. 胡仕良,羅軍,王慧,趙旺生,李君,孫雨婷,朱江江,石恒波.  農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報(bào). 2012(09)
[2]西農(nóng)薩能奶山羊甘油三酯水解酶基因（ATGL）的cDNA克隆與組織表達(dá)分析[J]. 滕炎玲,羅軍,李君,趙旺生,王楨,王維,胡仕良.  農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報(bào). 2010(06)



本文編號(hào)：3259698