大腸桿菌（Escherichia coli）依據(jù)其遺傳特性和臨床表現(xiàn)共分為三類：共生型大腸桿菌,腸道致病性大腸桿菌以及腸外致病性大腸桿菌（Extraintestinal Pathogenic Escherichia coli, ExPEC）。ExPEC在近些年已經(jīng)成為廣泛威脅全球人類和動(dòng)物健康的致病菌,在人體內(nèi)主要能引起腎盂腎炎和新生兒腦膜炎,在禽致病方面,主要引起敗血癥、氣囊炎和心包炎等,在豬致病方面,主要引起腦膜炎、肺炎和敗血癥。因腸外致病性大腸桿菌的血清型、毒力因子、基因結(jié)構(gòu)和基因表達(dá)調(diào)控的錯(cuò)綜復(fù)雜性,對(duì)ExPEC的致病機(jī)制還沒完全研究清楚。在2004-2007年間,本實(shí)驗(yàn)室對(duì)已分離鑒定正確的315株豬腸外致病性大腸桿菌流行病學(xué)研究中,發(fā)現(xiàn)其優(yōu)勢血清型為O11、08、O101、0138、0161、026,優(yōu)勢群系為B2和D群系。莢膜是覆蓋在細(xì)菌表面的主要多糖結(jié)構(gòu),能夠保護(hù)細(xì)菌免受宿主免疫系統(tǒng)的清除。2群型表達(dá)莢膜的基因組kps基因位點(diǎn)是由3個(gè)區(qū)域組成的一個(gè)保守性結(jié)構(gòu)。kpsM是枷基因簇區(qū)域3中高度保守的一個(gè)基因位點(diǎn),編碼ABC轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白中橫跨內(nèi)膜的通道蛋白。本實(shí)驗(yàn)室對(duì)已測序的豬腸外... 

【文章來源】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)湖北省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：60 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略詞表(Abbreviation)
1 前言
    1.1 大腸桿菌的病原學(xué)
    1.2 大腸桿菌的流行病學(xué)及致病機(jī)制
        1.2.1 流行病學(xué)
        1.2.2 UPEC的致病機(jī)制
        1.2.3 NMEC的致病機(jī)制
    1.3 ExPEC毒力因子的概述
        1.3.1 黏附素
        1.3.2 毒素
        1.3.3 鐵攝取系統(tǒng)
    1.4 細(xì)菌莢膜多糖的概述
2 研究目的和意義
3 材料與方法
    3.1 材料
        3.1.1 菌株、質(zhì)粒和培養(yǎng)條件
        3.1.2 動(dòng)物和細(xì)胞
        3.1.3 主要藥品、試劑、試劑盒與儀器
        3.1.4 主要培養(yǎng)基及抗生素配制
        3.1.5 主要溶液配制
        3.1.6 引物
    3.2 方法
        3.2.1 大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞的制備
        3.2.2 豬腸外致病性大腸桿菌的復(fù)蘇增殖及基因組DNA的提取
        3.2.3 PCR擴(kuò)增
        3.2.4 DNA的純化與回收
        3.2.5 DNA與載體的連接反應(yīng)
        3.2.6 連接產(chǎn)物的轉(zhuǎn)化
        3.2.7 質(zhì)粒的小量制備(堿裂解法)
        3.2.9 PCN033菌株kpsM基因前后臂片段的克隆與鑒定
        3.2.10 重組自殺性質(zhì)粒pREAkpsM的構(gòu)建
        3.2.11 接合轉(zhuǎn)移與豬腸外致病性大腸桿菌基因缺失株的構(gòu)建
        3.2.12 Southern blot
        3.2.13 豬腸外致病性大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞的制備
        3.2.14 豬腸外致病性大腸桿菌的電轉(zhuǎn)化
        3.2.15 缺失菌株生長特性的研究
        3.2.16 缺失菌株對(duì)小鼠的毒力試驗(yàn)及LD_(50)的測定
        3.2.17 細(xì)胞感染試驗(yàn)
        3.2.18 細(xì)胞吞噬試驗(yàn)
        3.2.19 血清殺菌試驗(yàn)
        3.2.20 透射電鏡觀察試驗(yàn)
4 結(jié)果與分析
    4.1 kpsM基因生物信息學(xué)相關(guān)分析
    4.2 重組轉(zhuǎn)移質(zhì)粒pRE112ΔkpsM的構(gòu)建與鑒定
    4.3 基因缺失突變株的篩選與鑒定
    4.4 Southern blot驗(yàn)證基因缺失突變株構(gòu)建成功
    4.5 △kpsM互補(bǔ)菌株△kpsM-kpsM的構(gòu)建與鑒定
    4.6 基因缺失突變株生物學(xué)特性分析
        4.6.1 遺傳穩(wěn)定性分析
        4.6.2 生長特性分析
    4.7 小鼠的感染試驗(yàn)及LD_(50)的測定
    4.8 細(xì)胞黏附試驗(yàn)
    4.9 細(xì)胞吞噬試驗(yàn)
    4.10 血清殺菌試驗(yàn)
    4.11 透射電鏡試驗(yàn)
5 討論
    5.1 kpsM基因的選定
    5.2 基因缺失突變株的構(gòu)建
    5.3 透射電鏡的觀察結(jié)果
    5.4 kpsM基因?qū)CN033毒力的影響
6 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]豬腸外致病性大腸桿菌的分離鑒定和藥敏試驗(yàn)[J]. 徐引弟,王治方,朱文豪,梁躍,郭成留.  河南農(nóng)業(yè)科學(xué). 2011(01)
[2]產(chǎn)志賀樣毒素和腸毒素大腸桿菌分子流行病學(xué)(英文)[J]. 冉雪琴,林尖兵,王嘉福.  微生物學(xué)報(bào). 2008(06)



本文編號(hào)：3259542