旋毛蟲(chóng)�。═richinosis）是由旋毛蟲(chóng)（Trichinella spiralis）引起的一種危害嚴(yán)重的人獸共患寄生蟲(chóng)病,是世界動(dòng)物衛(wèi)生組織（OIE）規(guī)定的B類疫病。能量代謝是所有生物的生存基礎(chǔ),而對(duì)于許多寄生蟲(chóng)來(lái)說(shuō),糖酵解是其產(chǎn)生能量的主要途徑。近些年的研究發(fā)現(xiàn),在糖酵解途徑中起重要作用的酶類在寄生蟲(chóng)的免疫調(diào)節(jié)和免疫逃避中發(fā)揮著重要作用,因此可以作為潛在的疫苗候選分子。醛縮酶（aldolase）、烯醇化酶（enolase）和己糖激酶（hexokinase）是糖酵解途徑中的3個(gè)關(guān)鍵酶,不僅在寄生蟲(chóng)的能量代謝中具有重要作用,也對(duì)寄生蟲(chóng)的入侵和免疫逃避提供幫助。為了探尋旋毛蟲(chóng)體內(nèi)的糖酵解酶類能否對(duì)宿主起到免疫保護(hù)作用,進(jìn)行了如下工作：1.旋毛蟲(chóng)醛縮酶（Tsald）、烯醇化酶（Tseno）和己糖激酶2（Tshk2）基因的克隆根據(jù)GenBank中發(fā)表的旋毛蟲(chóng)Tsald基因序列（XM₀03374234）、Tseno基因序列（AF363629.1）和Tshk2基因序列（XM₀03371674.1）分別設(shè)計(jì)引物。以旋毛蟲(chóng)肌幼蟲(chóng)總RNA為模板,用RT-P... 

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖１－１旋毛蟲(chóng)成蟲(chóng)（ａ雌蟲(chóng)，ｂ雄蟲(chóng)）（引白Ｖｉｌｌｅｌｌａ）??Ｆｉ１－１?ａ．Ａｄｕｌｔ?ｆｅｍａｌｅ?Ｔ．?ｓｉｒａｌｉｓｂ，Ａｄｕｌｔ?ｍａｌｅ?Ｔ，?ｓｉｒａｌｉｓ?（?Ｆｒｏｍ?Ｖｉｌｌｅｌｌａ）??

ａ?ｂ??圖１－１旋毛蟲(chóng)成蟲(chóng)（ａ雌蟲(chóng)，ｂ雄蟲(chóng)）（引白Ｖｉｌｌｅｌｌａ）??Ｆｉｇ?１－１?ａ．?Ａｄｕｌｔ?ｆｅｍａｌｅ?Ｔ．?ｓｐｉｒａｌｉｓ；?ｂ，?Ａｄｕｌｔ?ｍａｌｅ?Ｔ，?ｓｐｉｒａｌｉｓ?（?Ｆｒｏｍ?Ｖｉｌｌｅｌｌａ）??１．３旋毛蟲(chóng)生活史??旋毛蟲(chóng)的生活史見(jiàn)圖１－２。當(dāng)人或動(dòng)物生食或半生食了含有肌幼蟲(chóng)時(shí)期旋毛蟲(chóng)的??肉類后，在胃液中胃酸和消化酶的作用下，幼蟲(chóng)從被消化了的肉中釋放出來(lái)，侵入小??腸上Ｈ分之二段的化狀上皮細(xì)胞中［７－８１，并在約３０個(gè)小時(shí)的時(shí)間內(nèi)通過(guò)４次賊皮發(fā)育??成成蟲(chóng)并開(kāi)始進(jìn)行交配。成年雌蟲(chóng)在交配后的第４天開(kāi)始產(chǎn)出新生幼蟲(chóng)。一條雌蟲(chóng)一??生最多能夠產(chǎn)出近２０００條新塵幼蟲(chóng)。在這個(gè)過(guò)程中，只要宿主的免疫系統(tǒng)沒(méi)有察覺(jué)??到雌蟲(chóng)便可＾文一直產(chǎn)蟲(chóng)。當(dāng)宿主的免疫應(yīng)答發(fā)揮作用時(shí)，便通過(guò)免疫反應(yīng)干擾雌蟲(chóng)體??內(nèi)蟲(chóng)卵的臟胎發(fā)育并通過(guò)一系列塵理反應(yīng)將成蟲(chóng)排出腸外，這一過(guò)程持續(xù)約數(shù)周。新??化幼蟲(chóng)具有像利劍般的口錐，能借此來(lái)穿透進(jìn)入淋己或血液循環(huán)中并進(jìn)入全身各處器??２??

現(xiàn)在人們已將兩類醒縮酶的催化機(jī)理研究清楚，發(fā)現(xiàn)它們分別有著各自的催化方??式［＾１］。第一型酸縮酶利用一個(gè)具有活性的賴氨酸殘基激活底物（果糖＿１，６＿二稱酸）??并與之形成Ｓｃｈｉｆ堿中間體從而實(shí)現(xiàn)底物麗的活化（圖３－２）。Ｓ沈ｉｆ堿隨后Ｗ稀胺的形??式使得底物４號(hào)位碳上的超基去質(zhì)子化，生成Ｇ３Ｐ和ＤＨＡＰ。其中一型醒縮酶催化位??點(diǎn)上賴氨酸與中間體形成穩(wěn)定的共價(jià)鍵來(lái)推動(dòng)反應(yīng)的進(jìn)行，此外，還發(fā)現(xiàn)在其駿基端??３４１？３６３位膚段對(duì)該酶的催化活性有明顯的調(diào)節(jié)作用，這可能與其同工酶在Ｃ－末端區(qū)??域周圍都有獨(dú)特的二級(jí)結(jié)構(gòu)有關(guān)。??相比之下，二型酵縮酶通過(guò)一種二價(jià)金屬離子（如巧離子、鎊離子）與底物上二??碳位的艱基和Ｈ碳位的徑基形成配位鍵，繼而通過(guò)Ｈ號(hào)位碳和四號(hào)位碳的裂解形成較??為穩(wěn)定的五碳嬌二醇化物中間體（圖３－２）。目前對(duì)二型酸縮酶研究的較為透徹的是從??大腸桿菌中獲得的醇縮酶（ｅｃＦＰＡ）。二型醒縮酶具有（有二型醇縮酶筒狀折疊結(jié)構(gòu)，??能夠?qū)⒋嬖谟冢茫┒送矤罱Y(jié)構(gòu)上的催化位點(diǎn)催化金屬離子與底物上二碳位的幾基和??Ｈ碳位的駿基形成味啤結(jié)構(gòu)，而起催化作用的是催化位點(diǎn)上位于１１０

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[3]日本血吸蟲(chóng)亮氨酸氨基肽酶和果糖二磷酸醛縮酶重組疫苗對(duì)小鼠的保護(hù)性免疫效果觀察[J]. 劉萍,沈繼龍,鐘政榮,羅慶禮.  安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào). 2010(06)
[4]旋毛蟲(chóng)TsP53重組蛋白對(duì)小鼠的免疫保護(hù)性[J]. 王鴻盛,李文卉,蓋文燕,姚菊霞,曲自剛,王艷華,張德林,薛慧文,付寶權(quán).  中國(guó)獸醫(yī)科學(xué). 2010(10)
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[8]α烯醇化酶——古老的蛋白,嶄新的功能[J]. 朱理安,方寧遠(yuǎn).  國(guó)際病理科學(xué)與臨床雜志. 2007(04)
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博士論文
[1]旋毛蟲(chóng)49ku ES抗原基因核酸疫苗構(gòu)建及免疫保護(hù)作用研究[D]. 路義鑫.東北農(nóng)業(yè)大學(xué) 2006

碩士論文
[1]日本血吸蟲(chóng)重組烯醇化酶研究[D]. 邱春輝.福建農(nóng)林大學(xué) 2009



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