為建立一種鑒定豬急性腹瀉綜合征病毒（SADS-CoV）的RT-PCR方法,根據(jù)NCBI登錄的SADS-CoV N基因保守區(qū)域序列,設(shè)計了3對引物（P1、P2和P3）,通過對SADS-CoV及其他6種病毒進行檢測,篩選出最合適的引物,然后對退火溫度、引物濃度、dNTPs濃度、rTaq DNA聚合酶濃度和循環(huán)次數(shù)等反應(yīng)條件進行了優(yōu)化。結(jié)果顯示,P3引物對SADS-CoV特異性最好,與其他病毒無交叉反應(yīng)。敏感性試驗顯示,該方法最低檢測限可達9.55×10² copies/μL;重復(fù)性試驗顯示該方法重復(fù)性良好。運用建立的RT-PCR方法,對廣東省的21份臨床樣品進行檢測,結(jié)果檢出SADS-CoV陽性樣品4份,陽性樣品的測序結(jié)果與其RT-PCR完全一致。結(jié)果表明,本研究成功建立了一種鑒定SADS-CoV的RT-PCR方法,且該方法具有檢測快速、成本廉價、特異性強、敏感性高和重復(fù)性好的優(yōu)點,可以用于SADS-CoV的臨床診斷。 

【文章來源】：中國動物檢疫. 2020,37(11)

【文章頁數(shù)】：6 頁

【部分圖文】：

引物特異性鑒定結(jié)果

退火溫度、引物濃度、r Taq DNA聚合酶和d NTP濃度的優(yōu)化結(jié)果

最佳循環(huán)次數(shù)優(yōu)化結(jié)果

【參考文獻】：
期刊論文
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