本試驗旨在研究中國蜂膠乙醇提取物（ethanol extract of Chinese propolis,EECP）對細(xì)菌脂多糖（lipopolysaccharide, LPS）刺激下體外培養(yǎng)奶牛乳腺上皮細(xì)胞炎癥相關(guān)基因mRNA轉(zhuǎn)錄水平和緊密連接滲透性的影響。EECP中總酚酸和總黃酮含量測定采用福林酚法和硝酸鋁法,并建立LPS誘導(dǎo)奶牛乳腺上皮細(xì)胞（bovine mammary epithelial cells,MAC-T）炎癥模型,采用CCK-8法測定EECP對MAC-T相對增殖率的影響,利用實時熒光定量PCR（RT-qPCR）評估EECP對LPS誘導(dǎo)的MAC-T細(xì)胞炎癥相關(guān)因子（IL-6、IL-8、TNF-α和IL-1β）相對mRNA轉(zhuǎn)錄水平;以及對緊密連接蛋白（occludin、ZO-1）相對mRNA轉(zhuǎn)錄水平進行檢測,并進一步利用免疫熒光技術(shù)對緊密連接膜蛋白進行定位,確定EECP對LPS誘導(dǎo)MAC-T細(xì)胞炎癥緊密連接滲透性的影響。結(jié)果顯示:EECP中總酚酸含量為106.35 mg沒食子酸當(dāng)量（GAE）·g^-1、總黃酮含量為320.85 mg蘆丁當(dāng)量（RE）·g... 

【文章來源】：畜牧獸醫(yī)學(xué)報. 2020,51(05)北大核心CSCD

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【部分圖文】：

不同濃度EECP對MAC-T增殖率的影響

從圖2中可知,LPS刺激組MAC-T增殖率極顯著低于空白組(P<0.01),但經(jīng)2.5～10 μg ·mL-1的EECP預(yù)處理后,其細(xì)胞活性顯著高于LPS刺激組(P<0.05)。結(jié)果表明,經(jīng)LPS刺激處理會降低MAC-T的活性,而添加EECP處理后能夠提高細(xì)胞活性。2.4 EECP對MAC-T炎癥相關(guān)因子mRNA轉(zhuǎn)錄的影響

LPS是一種重要的毒素因子,能夠誘導(dǎo)奶牛發(fā)生乳腺炎,使乳腺組織發(fā)生損傷,并促進炎癥因子TNF-α、IL-1β、IL-6的表達,使機體產(chǎn)生免疫應(yīng)答。TNF-α是一種促炎細(xì)胞因子,在LPS誘導(dǎo)的乳腺免疫反應(yīng)過程中,牛奶中會有大量的TNF-α分泌[23]。IL-6是一種多功能細(xì)胞因子,可調(diào)節(jié)免疫反應(yīng),造血功能,急性期反應(yīng),炎癥和中樞神經(jīng)系統(tǒng)[24]。IL-8是主要的趨化因子,能夠指導(dǎo)中心粒細(xì)胞向炎癥處募集[18]。IL-1β是由免疫細(xì)胞、基底細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞分泌的重要炎癥介質(zhì),能夠促進促炎細(xì)胞因子的產(chǎn)生,以及調(diào)節(jié)炎性細(xì)胞的生長、分化和運動[25]。RT-qPCR結(jié)果顯示,在EECP預(yù)處理條件下,奶牛乳腺上皮細(xì)胞炎癥相關(guān)因子(TNF-α、IL-8、IL-6和IL-1β) mRNA 的轉(zhuǎn)錄量顯著下降。研究報道,蜂膠提取物中主要的多酚類化合物(咖啡酸苯乙酯、咖啡酸和槲皮素)能夠抑制LPS誘導(dǎo)炎癥相關(guān)因子(IL-1β、IL-6和TNF-α)的表達,降低核因子κB (NF-κB) 的轉(zhuǎn)錄活性,發(fā)揮抗炎作用[26-28]。中國蜂膠能通過抑制細(xì)胞自身自噬和MAPK/NF-κB信號通路相關(guān)的機制抑制LPS誘導(dǎo)的人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞中的氧化應(yīng)激和炎癥[10]。圖4 不同濃度 EECP 對MAC-T在LPS 刺激下occludin、ZO-1基因mRNA轉(zhuǎn)錄水平的影響


本文編號：3221675