鴨疫里默氏桿菌（Riemerella anatipestiferr,RA）是屬于黃桿菌科的革蘭氏陰性菌,是引起鴨和其它家禽傳染性漿膜炎和敗血癥的病原菌。本次試驗將研究Feo系統(tǒng)在鴨疫里默氏桿菌轉運亞鐵離子過程中的作用,以及缺失Feo系統(tǒng)對鴨疫里默氏桿菌定殖能力的影響。主要試驗結果如下:1 RA ATCC 11845株feoA,feoB和feoAB基因缺失株及回補菌株的構建分別將feoA、feoB和feoAB基因的上下游約800 bp的同源臂及紅霉素抗性基因片段用PCR擴增并融合,融合的基因片段通過自然轉化的方法導入RAATCC 11845菌株中,再用紅霉素抗性篩選及PCR鑒定,成功構建了RA ATCC11845（35）feoA,RA ATCC 11845（35）feoB和RA ATCC 11845（35）feoAB菌株。隨后,將feoA,feoB和feoAB基因克隆至穿梭質粒pFY02,將重組質粒通過結合轉移的方法轉入相應缺失菌株中,成功構建相應的回補菌株。2 RA ATCC 11845株Feo系統(tǒng)的功能鑒定在TSB,含有60μmol/L Dip（二價鐵離子螯合劑）的TSB和含有40μ... 

【文章來源】：四川農業(yè)大學四川省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：76 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

擴增HighEXP，pRA0726ori及oriT基因Fig.1-1AmplificationofHighEXP,pRA0726oriandoriT注：M:DNAMarker,Lane1:HighEXP,Lane2:pRA0726ori,Lane3:oriT.

1-1 擴增 High EXP，pRA0726 ori 及 o Amplification of High EXP, pRA0726Marker, Lane 1: High EXP, Lane 2: pRA0PM5::oriT粒的結合轉移效率，本研究將轉性內切酶 Sph I 和 Hind III 雙酶切段并連接兩個片段，將連接產物轉性篩選后長出的菌落，再經 PCR電泳結果可以看出與預期結果一致將新構建質粒命名為 pPM5::oriT。

圖 1-3 PCR 鑒定 pRA0726 ori 基因Fig.1-3 The PCR identification of pRA072注： M: DNAMarker, Lane 1: pRA0726 pFY02片段插入穿梭質粒上且提高基因的表多個酶切位點的高表達啟動子序列酶切 High EXP 序列和質粒 pFY01，連接產物轉化至 E. coli DH5α，通過，再經 PCR 鑒定 High EXP 基因（其與預期結果一致（圖 1-4）。抽提質命名為 pFY02。

【參考文獻】：
期刊論文
[1]鴨疫里默氏桿菌RecA作為一種內參蛋白的評價[J]. 廖何斌,劉馬峰,程安春.  中國生物工程雜志. 2015(06)
[2]革蘭氏陰性菌血紅素轉運系統(tǒng)結構及功能特點[J]. 程興軍,劉馬峰,程安春.  中國生物化學與分子生物學報. 2014(09)



本文編號：3214544