J亞群禽白血病病毒（Avian leukosis virus subgroup J,ALV-J）、馬立克氏病病毒（Marek’s disease virus,MDV）、豬圓環(huán)病毒病毒2型（Porcine circovirus 2,PCV2）這三種病毒都可以引起被感染動物免疫抑制,造成動物機體免疫力下降,從而利于其它病原菌的入侵,引起兩種或多種疾病的并發(fā)感染,增加了診斷和治療的難度。目前MDV與PCV2主要通過接種疫苗來進行防控,雖然在一定程度上減少了疾病的發(fā)生,但同時也加劇了毒株的變異速度。ALV-J主要通過淘汰方式來進行凈化,但2018年中國幾個省份幾乎同時爆發(fā)由ALV-J引起的髓細胞瘤病,使得ALV-J的凈化之路愈發(fā)艱巨。而抗生素添加劑的使用嚴重破壞了動物腸道的微生態(tài)平衡,藥物殘留也影響了畜產品的品質和人類健康。因此,急需開發(fā)出一種無毒副作用又不會使病原菌產生耐藥性的藥物來解決這一問題。防御素具廣譜抗微生物活性,能有效地殺滅病毒、細菌、真菌、螺旋體等病原微生物,對腫瘤細胞也有細胞毒作用,且迄今尚未發(fā)現有致病菌株對其產生耐藥性。許多證據表明,防御素對囊膜病毒有顯著抑制作用。β-防御素... 

【文章來源】：山東農業(yè)大學山東省

【文章頁數】：55 頁

【學位級別】：碩士

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中文摘要
Abstract
1 前言
    1.1 抗菌肽簡介
        1.1.1 抗菌肽的定義
        1.1.2 抗菌肽的分類
    1.2 抗菌肽家族成員-防御素簡介
        1.2.1 防御素的定義
        1.2.2 防御素的分類
        1.2.3 防御素的生物學作用及機制
    1.3 禽β-防御素的研究進展
        1.3.1 禽β-防御素的結構特征及生物學特性
        1.3.2 禽β-防御素的研究展望
    1.4 ALV-J、MDV、PCV2 簡介
        1.4.1 ALV-J的病原學與致病性
        1.4.2 MDV的病原學與致病性
        1.4.3 PCV2 的病原學與致病性
    1.5 研究目的與意義
2 材料與方法
    2.1 試驗材料
        2.1.1 病毒、載體、菌種、細胞和試驗動物
        2.1.2 試驗試劑
        2.1.3 主要試劑的配制
        2.1.4 主要試驗儀器
    2.2 試驗方法
        2.2.1 AvBD10 目的基因的獲取
            2.2.1.1 AvBD10 蛋白引物設計與合成
            2.2.1.2 組織總RNA的提取
            2.2.1.3 瓊脂糖凝膠電泳獲取目的片段
            2.2.1.4 目的片段的回收
        2.2.2 重組AvBD7和AvBD10 的原核表達
            2.2.2.1 融合表達載體的構建
            2.2.2.2 重組AvBD7和AvBD10 的誘導與表達
        2.2.3 AvBD7 蛋白和AvBD10 蛋白的純化與檢驗
            2.2.3.1 AvBD7 蛋白和AvBD10 蛋白的純化
            2.2.3.2 蛋白濃度的測定
            2.2.3.3 SDS-PAGE和 western blot檢驗蛋白純化結果
        2.2.4 重組AvBD7和AvBD10 蛋白的體外抗病毒試驗
            2.2.4.1 重組AvBD7和AvBD10 蛋白對細胞活性的影響
            2.2.4.2 qPCR檢測AvBD7和AvBD10 蛋白體外抗病毒效果
            2.2.4.3 Western blot檢測AvBD7和AvBD10 蛋白體外抗病毒效果
        2.2.5 AvBD7和Av BD10 蛋白體內抗MDV試驗
            2.2.5.1 體內抗病毒試驗設計
            2.2.5.2 大體剖檢病變觀察
            2.2.5.3 血涂片觀察
            2.2.5.4 組織病理學觀察
3 結果與分析
    3.1 目的基因的獲取
        3.1.1 設計引物提取目的基因
        3.1.2 重組質粒鑒定及序列對比
    3.2 AvBD7和AvBD10 蛋白原核表達
        3.2.1 原核表達載體構建
        3.2.2 AvBD7和Av BD10 蛋白的誘導表達
        3.2.3 純化AvBD7和AvBD10 蛋白的濃度測定
        3.2.4 純化AvBD7和AvBD10 蛋白的SDS-PAGE和western blot檢測
    3.3 AvBD7和AvBD10 蛋白體外抗病毒試驗
        3.3.1 AvBD7和AvBD10蛋白對細胞的毒性檢測
        3.3.2 qPCR檢測AvBD7和AvBD10 蛋白體外抗病毒效果
        3.3.3 Western blot檢測AvBD7和AvBD10 蛋白體外抗病毒效果
    3.4 AvBD7和AvBD10 蛋白體內抗MDV試驗
        3.4.1 大體剖檢病變觀察
        3.4.2 血涂片觀察
        3.4.3 組織病理學觀察
4 討論
5 結論
參考文獻
致謝
攻讀學位期間發(fā)表論文情況


【參考文獻】：
期刊論文
[1]抗菌肽生物活性及其作用機理研究進展[J]. 王為棟,孫海娟.  當代畜牧. 2018(33)
[2]抗菌肽的研究進展[J]. 李翠玲,劉勇.  嶺南急診醫(yī)學雜志. 2018(05)
[3]近年來ALV-J的國內外研究進展[J]. 徐晴晴,王峰,孫培,王文秀.  中國獸醫(yī)學報. 2018(09)
[4]雞馬立克氏病的流行特點、臨床癥狀、鑒別和防控[J]. 肖秋紅.  現代畜牧科技. 2018(08)
[5]抗菌肽研究進展及應用[J]. 甄陽光.  飼料博覽. 2018(07)
[6]抗菌肽及類抗菌肽的設計、合成及應用[J]. 周欣宇,周春才.  化學進展. 2018(07)
[7]豬圓環(huán)病毒2型的研究進展[J]. 沈強.  獸醫(yī)導刊. 2018(13)
[8]抗菌肽與類抗菌肽研究[J]. 孫榕壑.  當代化工研究. 2018(05)
[9]抗菌肽抗細菌機理研究進展[J]. 單安山,田昊天,邵長軒,譚鵬,來振衡.  東北農業(yè)大學學報. 2018(03)
[10]抗菌肽的作用機理及應用[J]. 王亞平,余維維,秦夢茹,楊勇,金德俊,饒犇.  湖北農業(yè)科學. 2018(05)



本文編號：3203672