生長抑素（Somatostatin,SS）抑制生長激素釋放和胃的蠕動(dòng)、胃酸分泌、營養(yǎng)物質(zhì)的吸收,阻礙飼料轉(zhuǎn)化和動(dòng)物生長;在生產(chǎn)實(shí)踐中,如果使用SS主動(dòng)免疫動(dòng)物產(chǎn)生針對SS的特異抗體和它中和,可避免SS發(fā)揮負(fù)面作用。常用免疫方法包括注射、口服和噴霧等多種方式,其中口服免疫應(yīng)用方便,可直接將疫苗投放于飼料中使用。但既往對使用SS免疫動(dòng)物提高生產(chǎn)性能的研究多以DNA疫苗為載體,極少見到重組功能性SS蛋白的高效制備方法。飼用酶是常見的飼料添加劑,動(dòng)物經(jīng)口攝入飼用酶在胃腸道中發(fā)揮降解底物、促生長和調(diào)節(jié)腸道菌群等功效,因此飼用酶作為功能小肽（例如SS）的融合表達(dá)載體具有天然優(yōu)越性;其中木聚糖酶在豬、雞甚至反芻動(dòng)物的飼料中均有成功應(yīng)用實(shí)例,它的應(yīng)用能降低食糜粘度、提高飼料轉(zhuǎn)化率。和另一種常用的飼料酶制劑纖維素酶不同,目前使用的木聚糖酶常常是單一酶類;而且我國使用畢赤酵母發(fā)酵制備重組木聚糖酶技術(shù)已經(jīng)非常成熟。因此,理論上可以將木聚糖酶和SS進(jìn)行融合表達(dá)以高效制備SS重組蛋白并口服免疫。本研究嘗試將三個(gè)不同微生物來源的木聚糖酶Np Xyl74（來自Neocallimastix patriciarum）、... 

【文章來源】：中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京市

【文章頁數(shù)】：81 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
主要符號對照表
第一章 緒論
    1.1 生長抑素的研究進(jìn)展
        1.1.1 生長抑素的發(fā)現(xiàn)
        1.1.2 SS的種類
        1.1.3 生長抑素的分布
        1.1.4 SS-14的結(jié)構(gòu)
        1.1.5 SS的作用
        1.1.6 SS的生理功能
        1.1.7 動(dòng)物SS的人工干預(yù)調(diào)控研究
        1.1.8 生長抑素免疫的研究進(jìn)展
    1.2 動(dòng)物的免疫系統(tǒng)
    1.3 木聚糖酶研究進(jìn)展
        1.3.1 木聚糖酶的分類
        1.3.2 木聚糖酶的催化機(jī)制
        1.3.3 木聚糖酶的表達(dá)
        1.3.4 木聚糖酶在飼料中作用機(jī)理
    1.4 本研究的目的與意義
第二章 生長抑素和木聚糖酶的融合表達(dá)
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 菌株和質(zhì)粒
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器、工具酶、試劑盒及其它生化試劑
        2.1.3 培養(yǎng)基及試劑配制
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 木聚糖酶-SS質(zhì)粒的構(gòu)建
        2.2.2 木聚糖酶和木聚糖酶-SS基因在畢赤酵母中的表達(dá)
        2.2.3 酶學(xué)性質(zhì)測定
    2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.3.1 融合木聚糖酶-SS基因的克隆及表達(dá)載體的構(gòu)建
        2.3.2 SS融合基因轉(zhuǎn)化子木聚糖酶酶活測定
        2.3.3 蛋白含量標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制及蛋白濃度測定
        2.3.4 木聚糖酶和木聚糖酶-SS酶學(xué)測定
    2.4 討論
    2.5 本章小結(jié)
第三章 融合表達(dá)的生長抑素抗原性和免疫原性研究
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.1 實(shí)驗(yàn)菌株與動(dòng)物
        3.1.2 培養(yǎng)基、實(shí)驗(yàn)試劑和實(shí)驗(yàn)材料
    3.2 實(shí)驗(yàn)儀器
    3.3 實(shí)驗(yàn)方法
        3.3.1 搖瓶水平的發(fā)酵培養(yǎng)及純化
        3.3.2 Western blot
        3.3.3 木聚糖酶-SS融合蛋白免疫小鼠
        3.3.4 ELISA檢測抗體效價(jià)
        3.3.5 收集小鼠血清
        3.3.6 斑點(diǎn)雜交(Dot-blot)
        3.3.7 小鼠的口服免疫
    3.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.4.1 木聚糖酶-SS融合蛋白抗原性分析
        3.4.2 木聚糖酶-SS融合蛋白免疫原性分析
        3.4.3 小鼠口服免疫木聚糖酶-SS融合蛋白增重分析
    3.5 討論
    3.6 本章小結(jié)
第四章 木聚糖酶-生長抑素融合蛋白高效發(fā)酵表達(dá)
    4.1 實(shí)驗(yàn)材料
        4.1.1 菌株
        4.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器、生化試劑
        4.1.3 培養(yǎng)基及溶劑配制
    4.2 實(shí)驗(yàn)方法
        4.2.1 畢赤酵母上罐發(fā)酵表達(dá)
        4.2.2 酶活及蛋白濃度測定
    4.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        4.3.1 畢赤酵母上罐發(fā)酵表達(dá)Np Xyl74-SS
        4.3.2 畢赤酵母上罐發(fā)酵表達(dá)Cb Xyn10C-SS
        4.3.3 畢赤酵母上罐發(fā)酵表達(dá)Bs Xyl11A-SS
    4.4 討論
    4.5 本章小結(jié)
第五章 全文結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡歷


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號：3202186