多胺（polyamines,PAs）是一類含有兩個及以上氨基、帶正電的小分子脂肪族含氮堿,廣泛存在于動物、植物、藻類和微生物體內(nèi),哺乳動物細(xì)胞中主要包括腐胺、亞精胺和精胺。研究表明,多胺在中東呼吸綜合征病毒（middle east respiratory syndrome virus,MERS）、脊髓灰質(zhì)炎病毒（poliovirus,PV）、寨卡病毒（zika,ZIKV）等多種病毒感染與復(fù)制中發(fā)揮著重要作用。豬繁殖與呼吸綜合征病毒（porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV）是一種嚴(yán)重危害養(yǎng)豬業(yè)的病毒,主要引起母豬的繁殖障礙以及新生仔豬的大量死亡,給養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大損失。目前,對多胺在PRRSV感染與復(fù)制中的作用尚無報(bào)道。本課題以多胺為切入點(diǎn),探討了多胺合成代謝途徑與PRRSV復(fù)制之間的相互關(guān)系,初步揭示了多胺調(diào)控PRRSV增殖的機(jī)制,為闡明PRRSV的感染機(jī)制奠定了基礎(chǔ)。主要研究內(nèi)容與結(jié)果如下:1.PRRSV感染胞內(nèi)多胺水平降低為了探討PRRSV感染后,細(xì)胞內(nèi)多胺水平的變化情況。將PRRSV接種PK-15

【文章來源】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)湖北省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：68 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略語表(ABBREVIATION)
第1章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 多胺
        1.1.1 多胺種類和化學(xué)結(jié)構(gòu)
        1.1.2 多胺與細(xì)胞
        1.1.3 多胺與病毒
    1.2 多胺的生物合成、分解代謝與轉(zhuǎn)運(yùn)
        1.2.1 多胺的生物合成
        1.2.2 鳥氨酸脫羧酶
        1.2.3 S-腺苷甲硫氨酸脫羧酶
        1.2.4 多胺的分解代謝
        1.2.5 亞精胺/精胺乙酰化酶1
        1.2.6 多胺的轉(zhuǎn)運(yùn)
    1.3 豬繁殖與呼吸綜合征病毒
        1.3.1 PRRSV病原特征
        1.3.2 PRRSV基因組結(jié)構(gòu)
第2章 研究目的與意義
第3章 材料與方法
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.1 細(xì)胞、毒株、菌株
        3.1.2 載體
        3.1.3 工具酶及主要試劑
        3.1.4 Western Blot所需實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.5 培養(yǎng)基及其配制
        3.1.6 主要緩沖液與相關(guān)試劑及其配制
        3.1.7 主要實(shí)驗(yàn)儀器及設(shè)備
        3.1.8 分子生物學(xué)分析軟件
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 原代PAM細(xì)胞的分離
        3.2.2 PRRSV增殖
        3.2.3 RNA提取
        3.2.4 野生型SAT1 及其酶活突變體真核表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建
        3.2.5 PCR產(chǎn)物或酶切產(chǎn)物的電泳檢測
        3.2.6 PCR產(chǎn)物或酶切產(chǎn)物的回收與純化
        3.2.7 限制性內(nèi)切酶酶切反應(yīng)
        3.2.8 外源DNA片段與質(zhì)粒載體的連接反應(yīng)
        3.2.9 大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞的制備(氯化鈣法)
        3.2.10 連接產(chǎn)物的轉(zhuǎn)化
        3.2.11 重組質(zhì)粒的制備與鑒定
        3.2.12 質(zhì)粒的轉(zhuǎn)染
        3.2.13 病毒滴度的測定
        3.2.14 CellTiter-Glo?發(fā)光細(xì)胞活力測定法
        3.2.15 MTT比色法
        3.2.16 Western Blot
        3.2.17 細(xì)胞多胺的薄層層析——熒光測定法
第4章 結(jié)果與分析
    4.1 豬源pCAGGS-Flag-SAT1 野生型及酶活突變體真核表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建
    4.2 薄層色譜法展開溶劑的選擇
    4.3 多胺促進(jìn)PRRSV增殖
        4.3.1 下調(diào)胞內(nèi)多胺水平拮抗PRRSV增殖
        4.3.2 外源多胺的添加促進(jìn)PRRSV增殖
    4.4 亞精胺、精胺促進(jìn)PRRSV增殖
    4.5 PRRSV感染胞內(nèi)多胺水平降低
    4.6 SAT1 抑制PRRSV的增殖
        4.6.1 PRRSV感染調(diào)控SAT1 mRNA水平
        4.6.2 Ⅰ型干擾素上調(diào)SAT1 mRNA水平
        4.6.3 SAT1 抑制PRRSV增殖
第5章 討論與結(jié)論
    5.1 討論
        5.1.1 薄層色譜法對多胺的測定
        5.1.2 多胺促進(jìn)PRRSV增殖的潛在機(jī)制
        5.1.3 SAT1 抑制PRRSV增殖的機(jī)制探討
        5.1.4 靶向多胺代謝的抗PRRSV藥物展望
    5.2 結(jié)論與課題展望
        5.2.1 結(jié)論
        5.2.2 課題展望
參考文獻(xiàn)
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]多胺的測定方法及其臨床應(yīng)用[J]. 沈佐君,楊樹德.  國外醫(yī)學(xué).臨床生物化學(xué)與檢驗(yàn)學(xué)分冊. 1994(05)

碩士論文
[1]高效液相色譜法測定海水中多胺的研究[D]. 付敏.中國科學(xué)院研究生院（海洋研究所） 2010



本文編號：3198151