發(fā)布時(shí)間：2021-05-19 03:21

　　禽戊型肝炎病毒（Avian hepatitis E virus,aHEV）是雞大肝大脾病（Big liver and spleen,BLS）和肝破裂出血綜合征（Hepatic rupture and hemorrhage syndrome,HRHS）的主要病原,主要侵害30-72周齡的產(chǎn)蛋雞群和肉種雞群,造成腹腔積血,卵巢機(jī)能衰退,肝臟發(fā)生脂肪或淀粉樣變性,偶爾出現(xiàn)肝脾腫大的現(xiàn)象,綜合致死率約為1%。2016年以來(lái),在我國(guó)多個(gè)雞群中發(fā)生了以肝脾腫大和破裂等為主要表現(xiàn)的肝破裂出血綜合征,在相關(guān)雞群中多次鑒定到禽HEV并從河北某蛋種雞場(chǎng)中鑒定到VaHEV-HB株。研究顯示,相比于其他禽HEV參考株,該毒株致病性較強(qiáng)且能引起雛雞發(fā)病。我國(guó)雞群中流行的高強(qiáng)毒力禽HEV與國(guó)外已報(bào)道的禽HEV有何差別?感染雞群誘導(dǎo)的免疫學(xué)反應(yīng)是怎樣的?本研究通過(guò)系統(tǒng)的動(dòng)物試驗(yàn)研究了該毒株的致病性,通過(guò)熒光定量PCR技術(shù)和轉(zhuǎn)錄組測(cè)序從兩方面綜合評(píng)價(jià)VaHEV-HB株感染雛雞后誘發(fā)的部分先天免疫反應(yīng)指標(biāo),并對(duì)全基因組進(jìn)行測(cè)序分析以探究其致病性升高的分子基礎(chǔ),為了解我國(guó)當(dāng)前流行的禽HEV分子變異和致病機(jī)制提供參考數(shù)據(jù)。... 

【文章來(lái)源】：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)山東省

【文章頁(yè)數(shù)】：74 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
符號(hào)說(shuō)明
中文摘要
Abstract
1 前言
    1.1 HEV概況
        1.1.1 HEV研究進(jìn)展
        1.1.2 HEV的基因組結(jié)構(gòu)
        1.1.3 HEV的宿主
        1.1.4 HEV的傳播
        1.1.5 HEV感染的臨床表現(xiàn)
        1.1.6 HEV診斷方法
            1.1.6.1 分子生物學(xué)診斷方法
            1.1.6.2 免疫學(xué)診斷方法
            1.1.6.3 免疫電子顯微鏡檢測(cè)
    1.2 禽HEV研究概況
        1.2.1 禽HEV病原學(xué)
        1.2.2 禽HEV的傳播途徑
        1.2.3 禽HEV癥狀
            1.2.3.1 肝炎脾大綜合征臨床癥狀
            1.2.3.2 大肝大脾病臨床癥狀
        1.2.4 禽HEV感染病變
            1.2.4.1 肝炎脾大綜合征病變
            1.2.4.2 大肝大脾病病變
        1.2.5 診斷
        1.2.6 防治
    1.3 禽類先天免疫
    1.4 轉(zhuǎn)錄組測(cè)序技術(shù)
        1.4.1 單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測(cè)序
        1.4.2 全轉(zhuǎn)錄組測(cè)序
        1.4.3 mRNA測(cè)序技術(shù)
        1.4.4 小RNA測(cè)序技術(shù)
        1.4.5 長(zhǎng)鏈非編碼RNA測(cè)序技術(shù)
        1.4.6 環(huán)狀RNA測(cè)序技術(shù)
    1.5 本研究的目的與意義
2.材料和方法
    2.1 材料
        2.1.1 毒株的背景及來(lái)源
        2.1.2 試驗(yàn)動(dòng)物
        2.1.3 主要儀器與試劑
            2.1.3.1 主要儀器
            2.1.3.2 主要試劑
            2.1.3.3 試劑配制
    2.2 方法
        2.2.1 病毒的擴(kuò)增與富集
        2.2.2 擴(kuò)增病毒的驗(yàn)證
            2.2.2.1 用于禽HEV核酸檢測(cè)引物的合成
            2.2.2.2 樣品RNA的提取
            2.2.2.3 禽HEV的 RT-PCR檢測(cè)
        2.2.3 部分先天免疫反應(yīng)指標(biāo)的檢測(cè)
            2.2.3.1 試驗(yàn)分組
            2.2.3.2 試驗(yàn)指標(biāo)
            2.2.3.3 用于檢測(cè)免疫相關(guān)細(xì)胞因子的引物合成
            2.2.3.4 病料處理及RNA提取
            2.2.3.5 通過(guò)RT-qPCR檢測(cè)部分先天免疫反應(yīng)相關(guān)指標(biāo)
            2.2.3.6 通過(guò)轉(zhuǎn)錄組測(cè)序檢測(cè)免疫相關(guān)基因表達(dá)
        2.2.4 病毒全基因組的擴(kuò)增、克隆及測(cè)序
            2.2.4.1 引物設(shè)計(jì)
            2.2.4.2 病毒RNA的 RT-PCR擴(kuò)增
            2.2.4.3 RT-PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的凝膠回收純化
            2.2.4.4 凝膠回收產(chǎn)物的連接
            2.2.4.5 連接產(chǎn)物的轉(zhuǎn)化
            2.2.4.6 病毒末端測(cè)序
            2.2.4.7 基因序列分析
3 結(jié)果
    3.1 病毒的擴(kuò)增與驗(yàn)證
    3.2 Va HEV-HB株感染對(duì)雛雞生長(zhǎng)的抑制作用
    3.3 Va HEV-HB株感染對(duì)雛雞肝臟和脾臟的損傷情況
    3.4 Va HEV-HB株感染雛雞后部分先天免疫反應(yīng)指標(biāo)的檢測(cè)與分析
    3.5 轉(zhuǎn)錄組結(jié)果分析
    3.6 Va HEV-HB株基因組分析
        3.6.1 Va HEV-HB株基因組分析
        3.6.2 禽HEV ORF1和ORF3 的變異位點(diǎn)
        3.6.3 系統(tǒng)發(fā)育分析
        3.6.4 禽HEV與正戊肝病毒屬A種 HEV的序列分析
4 討論
    4.1 Va HEV-HB株感染SPF雞致病性
    4.2 Va HEV-HB株全基因組分析
5 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝
攻讀學(xué)位期間發(fā)表論文情況


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]轉(zhuǎn)錄組測(cè)序技術(shù)的研究和應(yīng)用進(jìn)展[J]. 崔凱,吳偉偉,刁其玉.  生物技術(shù)通報(bào). 2019(07)
[2]雞大肝大脾病毒RT-PCR檢測(cè)方法的建立及其檢測(cè)[J]. 馬玉玲,楊德吉,陸承平.  中國(guó)病毒學(xué). 2005(02)
[3]部分雞場(chǎng)雞大肝和大脾病的血清學(xué)調(diào)查[J]. 楊德吉,單松華,侯世忠,王亞菊,薄其云,徐福南.  中國(guó)獸醫(yī)科技. 1997(06)



本文編號(hào)：3195013