發(fā)布時(shí)間：2021-05-17 23:39

　　為了建立一種快速定量檢測(cè)豬偽狂犬病病毒（PRV）gB蛋白抗體的競(jìng)爭(zhēng)化學(xué)發(fā)光酶聯(lián)免疫檢測(cè)方法,以大腸桿菌表達(dá)并純化的豬偽狂犬病病毒gB重組蛋白作為包被抗原,以辣根過氧化物酶標(biāo)記的抗gB蛋白單克隆抗體作為酶標(biāo)抗體,以國家參考品稀釋制備的校準(zhǔn)品繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線實(shí)現(xiàn)定量檢測(cè),成功建立的PRV-gB-CLEIA在45 min內(nèi)即可完成檢測(cè),可檢測(cè)到最大稀釋倍數(shù)為1∶2 048稀釋的國家參考品;與豬瘟等其他5種病毒抗原的標(biāo)準(zhǔn)陽性血清無交叉反應(yīng);批內(nèi)變異系數(shù)為1.13%～9.47%,批間變異系數(shù)為2.43%～14.07%,重復(fù)性和穩(wěn)定性較好。通過對(duì)采集的180份臨床血清檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行比較,該方法與中和試驗(yàn)陽性符合率為94.00%,陰性符合率為96.92%,總符合率為96.11%,明顯優(yōu)于商品化ELISA試劑盒。本研究建立的PRV-gB-CLEIA檢測(cè)方法可以用于PRV gB抗體的快速定量檢測(cè)。 

【文章來源】：畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2020,51(03)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：10 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 病毒、細(xì)菌、細(xì)胞、血清及實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
    1.2 主要儀器和試劑
    1.3 抗PRV gB蛋白單克隆抗體的制備
    1.4 抗PRV gB蛋白單克隆抗體的鑒定
        1.4.1 Western blot分析
        1.4.2 特異性鑒定
        1.4.3 應(yīng)用性鑒定
    1.5 PRV gB蛋白抗體競(jìng)爭(zhēng)化學(xué)發(fā)光酶聯(lián)免疫檢測(cè)方法(CLEIA)的建立
        1.5.1 最佳濃度的確定
        1.5.2 最佳緩沖液的確定
        1.5.3 最佳反應(yīng)時(shí)間的確定
        1.5.4 校準(zhǔn)品的制備
        1.5.5 臨界值的確定
        1.5.6 特異性試驗(yàn)
        1.5.7 敏感性試驗(yàn)
        1.5.8 重復(fù)性試驗(yàn)
        1.5.9 保存期研究
        1.5.10 比對(duì)試驗(yàn)
2 結(jié) 果
    2.1 抗PRV gB蛋白單克隆抗體的制備
    2.2 單抗的特異性鑒定
    2.3 單抗的應(yīng)用性鑒定
    2.4 PRV gB蛋白抗體競(jìng)爭(zhēng)化學(xué)發(fā)光酶聯(lián)免疫檢測(cè)方法(CLEIA)的建立
        2.4.1 最佳濃度的確定
        2.4.2 最佳緩沖液的確定
        2.4.3 最佳反應(yīng)時(shí)間的確定
        2.4.4 校準(zhǔn)品的制備
        2.4.5 臨界值的確定
        2.4.6 特異性試驗(yàn)
        2.4.7 敏感性試驗(yàn)
        2.4.8 重復(fù)性試驗(yàn)
        2.4.9 保存期研究
        2.4.10 比對(duì)試驗(yàn)
3 討 論
4 結(jié) 論



本文編號(hào)：3192677