發(fā)布時間：2021-05-14 19:50

　　J亞群禽白血病病毒（Avian leukosis virus subgroup J,ALV-J）是一種典型的致瘤性逆轉(zhuǎn)錄病毒,該病毒基因組主要編碼三個基因,即病毒衣殼蛋白（gag）、聚合酶（pol）和囊膜蛋白（env）。ALV-J侵染宿主細胞時,首先吸附到細胞特異性受體進入細胞漿,ALV-J自身所攜帶的反轉(zhuǎn)錄酶介導病毒從基因組RNA逆轉(zhuǎn)錄成前體病毒DNA,然后整合到宿主細胞基因組中利用宿主RNA聚合酶轉(zhuǎn)錄生成新病毒RNA,并進一步翻譯生成病毒的各種前體蛋白和以及裝配病毒粒子的成熟蛋白質(zhì),最后通過出芽的方式釋放到胞外。ALV-J從吸附到脫殼（出芽）需要經(jīng)歷了復雜的生理過程;同時,ALV-J和其他病毒一樣,基因組結(jié)構(gòu)比較簡單,缺乏自身復制所需的完整酶系統(tǒng),所以ALV-J在復制過程中需要劫持對自身有利的宿主蛋白,利用宿主蛋白的相關(guān)功能和特性來完成自身復制,但是,參與ALV-J復制的相關(guān)宿主蛋白至今鮮有報道。為了明確對ALV-J復制起關(guān)鍵作用的宿主蛋白,本研究通過蛋白質(zhì)組學（Tandem mass tag,TMT）方法來篩選相關(guān)差異表達蛋白。首先對ALV-J感染的DF-1細胞和正常DF-1細胞... 

【文章來源】：山東農(nóng)業(yè)大學山東省

【文章頁數(shù)】：54 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
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中文摘要
Abstract
1.前言
    1.1 禽白血病病毒概述
        1.1.1 ALV分類
        1.1.2 ALV-J病毒基因組結(jié)構(gòu)
        1.1.3 ALV-J復制過程
    1.2 膠原三螺旋重復蛋白1(CTHRC1)概述
        1.2.1 CTHRC1 結(jié)構(gòu)特征
        1.2.2 CTHRC1 生物學功能和表達調(diào)控
        1.2.3 CTHRC1 參與腫瘤的病理過程
    1.3 本研究的目的與意義
2.材料與方法
    2.1 主要試劑及耗材
    2.2 主要緩沖液
    2.3 試驗地點
    2.4 實驗設(shè)備
    2.5 細胞及毒株
        2.5.1 細胞的傳代培養(yǎng)
        2.5.2 細胞的接毒
        2.5.3 ALV-J感染SPF雞胚
    2.6 蛋白質(zhì)組學
    2.7 CTHRC1 堿基序列的優(yōu)化和CTHRC1 過表達載體的構(gòu)建
    2.8 CTHRC1 shRNA的設(shè)計與構(gòu)建
    2.9 質(zhì)粒轉(zhuǎn)染
    2.10 Real-time PCR/qPCR
        2.10.1 細胞總RNA的提取
        2.10.2 RNA逆轉(zhuǎn)錄為c DNA
        2.10.3 Real-time PCR
        2.10.4 ALV-J絕對熒光定量PCR體系的建立
    2.11 Western blot
        2.11.1 細胞裂解
        2.11.2 BCA法測定蛋白的濃度
        2.11.3 Western blot檢測蛋白表達水平
    2.12 免疫組織化學
    2.13 激光共聚焦
    2.14 免疫共沉淀
    2.15 ELISA
    2.16 數(shù)據(jù)分析
3.結(jié)果與分析
    3.1 ALV-J gp85 基因的絕對熒光定量PCR體系的建立
    3.2 CTHRC1 密碼子的優(yōu)化及酶切和測序鑒定
    3.3 基于蛋白質(zhì)組學分析,CTHRC1 高表達可能與ALV-J復制有關(guān)
    3.4 ALV-J 感染促進 CTHRC1 的表達
        3.4.1 在體外 ALV-J 激活 CTHRC1 的表達
        3.4.2 ALV-J感染促進體內(nèi)CTHRC1 表達
    3.5 過表達CTHRC1 促進ALV-J復制
    3.6 敲低 CTHRC1 抑制 ALV-J 復制
    3.7 CTHRC1和ALV-J的 SU蛋白互作
4.討論
5.結(jié)論
6.參考文獻
7.致謝
8.攻讀學位期間發(fā)表論文及專利情況


【參考文獻】：
期刊論文
[1]膠原三螺旋重復蛋白-1參與疾病作用研究進展[J]. 韓樂,張玲玲,魏偉.  中國藥理學通報. 2017(07)
[2]CTHRC1與腫瘤關(guān)系的研究進展[J]. 王萍,房靜遠.  生命科學. 2010(08)
[3]腫瘤浸潤轉(zhuǎn)移分子機制的研究進展[J]. 黃海力,王孟薇.  生物技術(shù)通訊. 2006(01)



本文編號：3186229