豬鏈球菌（Streptococcus suis）是一種人獸共患病原菌,感染仔豬可導(dǎo)致患關(guān)節(jié)炎、敗血癥和腦膜炎等,對養(yǎng)豬業(yè)以及公共衛(wèi)生均構(gòu)成非常嚴(yán)重的威脅。目前,對豬鏈球菌病菌的防控主要依賴抗生素治療,但抗生素的濫用,導(dǎo)致臨床分離的多數(shù)病原菌株呈現(xiàn)嚴(yán)重耐藥和多重耐藥特性,細(xì)菌耐藥問題日趨嚴(yán)重,阻礙了該病的有效防控,因此發(fā)掘新的抗菌制劑尤為重要;來源于噬菌體的裂解酶（Lysin）具有高效、快速殺菌,特異性強(qiáng),且不易產(chǎn)生耐藥性等特點(diǎn),是一種潛在的新型抗菌制劑。本研究基于豬鏈球菌噬菌體裂解酶Ply5218在體外裂菌和在小鼠體內(nèi)抗感染的良好效果,應(yīng)用Ply5218對發(fā)病仔豬進(jìn)行治療。選用20 kg大小的仔豬,采取“頸部攻擊-裂解酶治療”策略,評價(jià)Ply5218的體內(nèi)抗感染效果。將16只仔豬隨機(jī)分成四組,分別為攻擊未治療組、未攻擊治療組,攻擊后立即治療組和攻擊后延遲1 h治療組。攻擊組仔豬均經(jīng)頸部肌肉注射10 mL（1.4×10¹00 CFU/mL）復(fù)壯的豬鏈球菌2型（Streptococcus suis serotype 2,SS2）強(qiáng)毒株HA9801,然后分別立即注射10... 

【文章來源】：上海交通大學(xué)上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：78 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 豬鏈球菌研究概況
        1.1.1 豬鏈球菌2型研究概況
        1.1.2 豬鏈球菌的耐藥性現(xiàn)狀
    1.2 豬鏈球菌噬菌體研究概況
        1.2.1 噬菌體概述
        1.2.2 噬菌體的分類
        1.2.3 噬菌體浸染細(xì)菌機(jī)制
        1.2.4 豬鏈球菌噬菌體研究進(jìn)展
    1.3 噬菌體裂解酶研究概況
        1.3.1 噬菌體裂解酶概況
        1.3.2 豬鏈球菌裂解酶研究概況
        1.3.3 裂解酶的獨(dú)特優(yōu)勢及應(yīng)用發(fā)展
    1.4 表達(dá)系統(tǒng)研究概況
        1.4.1 重組蛋白表達(dá)系統(tǒng)比較
        1.4.2 酵母表達(dá)系統(tǒng)
        1.4.3 巴斯德畢赤酵母表達(dá)系統(tǒng)的優(yōu)點(diǎn)
    1.5 本研究的目的與意義
第二章 裂解酶PLY5218治療仔豬豬鏈球菌2型感染研究
    2.1 材料
        2.1.1 菌株和質(zhì)粒
        2.1.2 主要試劑
    2.2 方法
        2.2.1 重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到表達(dá)菌BL21
        2.2.2 Ply5218蛋白的表達(dá)及純化
        2.2.3 裂解酶的安全性評估
        2.2.4 仔豬感染鏈球菌HA801治療方案
    2.3 結(jié)果
        2.3.1 重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到表達(dá)菌BL21
        2.3.2 Ply5218蛋白的表達(dá)及純化
        2.3.3 裂解酶的安全性評估
        2.3.4 仔豬感染鏈球菌HA801治療方案
    2.4 討論
第三章 裂解酶PLY5218的真核表達(dá)及活性研究
    3.1 材料
        3.1.1 菌株及載體
        3.1.2 主要試劑和酶
        3.1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
    3.2 方法
        3.2.1 Ply5218密碼子優(yōu)化
        3.2.2 酵母感受態(tài)細(xì)胞的制作
        3.2.3 Ply5218表達(dá)菌株的構(gòu)建
        3.2.4 裂解酶Ply5218真核表達(dá)及活性初篩
        3.2.5 誘導(dǎo)條件的優(yōu)化
        3.2.6 蛋白的純化
        3.2.7 酶活性的測定
        3.2.8 確定HA9801攻毒量
        3.2.9 ICR小鼠治療實(shí)驗(yàn)
    3.3 結(jié)果
        3.3.1 Ply5218密碼子優(yōu)化
        3.3.2 酵母感受態(tài)細(xì)胞的制作
        3.3.3 Ply5218表達(dá)菌株的構(gòu)建
        3.3.4 裂解酶Ply5218真核表達(dá)及活性初篩
        3.3.5 誘導(dǎo)條件的優(yōu)化
        3.3.6 蛋白的純化
        3.3.7 酶活性的測定
        3.3.8 確定HA9801攻毒量
        3.3.9 ICR小鼠治療實(shí)驗(yàn)
    3.4 討論
第四章 PLY5218活性域及關(guān)鍵氨基酸位點(diǎn)的鑒定
    4.1 材料
    4.2 方法
        4.2.1 目的基因的分段截短及表達(dá)菌株的構(gòu)建
        4.2.2 截短片段的表達(dá)及活性檢測
        4.2.3 關(guān)鍵氨基酸位點(diǎn)的選擇與突變
        4.2.4 突變體表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建、表達(dá)及活性檢測
        4.2.5 裂解酶Ply5218與突變蛋白的活性比較
    4.3 結(jié)果
        4.3.1 目的基因的分段截短及表達(dá)菌株的構(gòu)建
        4.3.2 截短片段的表達(dá)及活性檢測
        4.3.3 關(guān)鍵氨基酸位點(diǎn)的選擇與突變
        4.3.4 突變株表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建,表達(dá)及活性檢測
        4.3.5 裂解酶Ply5218與突變蛋白的活性比較
    4.4 討論
第五章 全文總結(jié)
參考文獻(xiàn)
附錄 試劑配制
致謝
本研究受以下項(xiàng)目資助
攻讀碩士學(xué)位期間已發(fā)表或錄用的論文


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[3]46株豬鏈球菌對大環(huán)內(nèi)酯類抗生素的耐藥性及PFGE分型[J]. 黃金虎,劉民星,商可心,王麗平.  南京農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào). 2013(04)
[4]蝎毒鎮(zhèn)痛活性肽基因BmK AngM1的密碼子優(yōu)化及其真核表達(dá)分析[J]. 楊金玲,高麗麗,朱平,侯琦,王芬,于文博,聶濤.  藥學(xué)學(xué)報(bào). 2012(10)
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[6]豬鏈球菌2型西藏小型豬感染模型的初步建立[J]. 周玉巖,李春玲,余煒烈,王貴平.  動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展. 2011(04)
[7]四川省一起伴中毒性休克綜合征的人感染豬鏈球菌2型暴發(fā)[J]. 楊維中,余宏杰,景懷琦,徐建國,陳志海,祝小平,汪華,劉學(xué)成,王世文,劉倫光,祖榮強(qiáng),羅隆澤,向妮娟,劉紅露,鐘文君,劉莉,孟玲,袁珩,高永軍,杜化茂,歐陽賓,葉長蕓,金冬,呂強(qiáng),崔志剛,黃燕,張守印,安向東,黃婷,周興余,馮燎,龐啟迪,舒躍龍,王宇.  中華流行病學(xué)雜志. 2006(03)
[8]東亞鉗蝎毒素BmαTX14的基因組克隆、真核表達(dá)純化及功能的初步研究[J]. 呂猛,王昆,曹志賤,蔣達(dá)和,毛歆,李文鑫.  生物工程學(xué)報(bào). 2005(06)
[9]32種抗菌藥物對臨床分離豬源鏈球菌的體外抗菌活性[J]. 王麗平,陸承平,唐家琪.  微生物學(xué)報(bào). 2004(06)
[10]巴斯德畢赤酵母表達(dá)系統(tǒng)研究進(jìn)展[J]. 王黎明,王琦,梅汝鴻.  微生物學(xué)雜志. 2004(02)

碩士論文
[1]應(yīng)用金黃色葡萄球菌噬菌體裂解酶LysGH15治療乳房炎的實(shí)驗(yàn)研究[D]. 肖峰.吉林大學(xué) 2015
[2]金黃色葡萄球菌裂解性噬菌體治療乳房炎的實(shí)驗(yàn)研究[D]. 李躍.吉林大學(xué) 2014



本文編號(hào)：3184679