2005年管花肉蓯蓉被收錄入《中國藥典》中，然而它對性激素水平的影響及機制并不清楚，因此本試驗旨在研究管花肉蓯蓉對雄性大鼠孕酮和睪酮水平的影響及其作用機制。CYP11A1和CYP17A1兩個酶是睪丸間質細胞中睪酮合成路徑的關鍵酶，肝臟中的CYP3A4是睪酮和孕酮的代謝酶，研究這三種酶的變化對了解肉蓯蓉影響睪酮水平的機制非常重要。由于上述三種酶均屬于P450酶家族，存在于細胞微粒體中，故本研究首先要建立組織微粒體的制備方法。該項研究內容主要包括三個方面：1.微粒體制備方法的建立由于肝臟中含有豐富的P450酶，因此以肝臟作為研究對象，制備肝臟微粒體，建立鈣鹽沉淀法。計算得所制備微粒體的P450蛋白含量約為0.55nmol/mg，處于正常范圍內（0.4-1.0nmol/mg）。采用CO還原差示光譜法檢測所制備的新鮮組織微粒體中總P450酶的活性，結果顯示樣品在波長為450nm處有特異性吸收峰。底物探針法檢測微粒體中CYP2E1的酶活性，紫外分光光度法測其代謝產物的含量。結果均顯示所制備微粒體活性良好，表明該方法建立成功。2.管花肉蓯蓉提取物對雄性大鼠性激素水平的影響及機制研究干燥的管花肉蓯蓉... 

【文章來源】：西北農林科技大學陜西省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數】：56 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 文獻綜述
    1.1 肉蓯蓉的簡介
    1.2 肉蓯蓉的植物學概況和分布
    1.3 肉蓯蓉的化學成分
        1.3.1 苯乙醇苷類
        1.3.2 環(huán)烯醚萜類
        1.3.3 其他成分
    1.4 肉蓯蓉的質量控制
    1.5 肉蓯蓉的藥理作用
        1.5.1 補腎壯陽
        1.5.2 促進骨骼生成
        1.5.3 抗氧化和抗凋亡作用
        1.5.4 免疫調節(jié)作用
        1.5.5 神經保護作用
        1.5.6 治療腸道疾病
        1.5.7 肝保護作用
        1.5.8 抗疼痛和抗炎作用
        1.5.9 抗疲勞作用
    1.6 睪酮合成路徑中的類固醇激素合成酶
        1.6.1 睪酮合成路徑
        1.6.2 類固醇激素合成酶
    1.7 化學物質對 CYP 酶的影響
    1.8 本研究的目的和意義
第二章 組織微粒體制備方法的建立
    2.1 材料
        2.1.1 試劑
        2.1.2 實驗動物
        2.1.3 所用溶液配制
        2.1.4 所用儀器
    2.2 試驗方法
        2.2.1 肝臟微粒體的制備
        2.2.2 肝臟微粒體蛋白濃度的測定
        2.2.3 所制備的微粒體蛋白活性鑒定
        2.2.4 CYP2E1 活性測定
    2.3 試驗結果
        2.3.1 微粒體蛋白含量測定
        2.3.2 肝臟微粒體活性測定
        2.3.3 CYP2E1 酶活性的測定
    2.4 討論
    2.5 小結
第三章 管花肉蓯蓉對大鼠性激素水平的影響及部分機理研究
    3.1 材料
        3.1.1 藥材和試劑
        3.1.2 實驗動物
        3.1.3 所用溶液配制
        3.1.4 所用儀器
    3.2 試驗方法
        3.2.1 管花肉蓯蓉提取物的制備
        3.2.2 管花肉蓯蓉提取物中苯乙醇苷類物質的含量測定
        3.2.3 給藥方案
        3.2.4 動物處理
        3.2.5 激素水平測定
        3.2.6 睪丸和肝臟微粒體的制備
        3.2.7 微粒體蛋白濃度測定
        3.2.8 睪丸微粒體活性檢測
        3.2.9 CYP11A1、CYP17A1 和 CYP3A4 蛋白表達量檢測
        3.2.10 免疫組織化學法檢測 CYP11A1 和 CYP17A1 蛋白表達量
    3.3 結果和分析
        3.3.1 管花肉蓯蓉提取物中苯乙醇苷類物質的含量
        3.3.2 管花肉蓯蓉對雄性大鼠生殖系統(tǒng)器官的影響
        3.3.3 管花肉蓯蓉對雄性大鼠性激素水平的影響
        3.3.4 微粒體蛋白濃度測定
        3.3.5 微粒體活性鑒定
        3.3.6 Western Blot 法檢測 CYP11A1、CYP17 A1 和 CYP3A4 的表達
        3.3.7 免疫組化法檢測睪丸組織中 CYP11A1 和 CYP17A1 的表達
    3.4 討論
    3.5 小結
第四章 管花肉蓯蓉的毒性作用
    4.1 材料
        4.1.1 試劑
        4.1.2 所用溶液配制
        4.1.3 所用儀器
    4.2 試驗方法
        4.2.1 肝臟和睪丸組織的石蠟切片制作
        4.2.2 石蠟切片 HE 染色
        4.2.3 血清中 ALT 水平的檢測
    4.3 結果和分析
        4.3.1 管花肉蓯蓉對大鼠肝指數及血清生化指標的影響
        4.3.2 管花肉蓯蓉對大鼠肝臟組織的影響
        4.3.3 管花肉蓯蓉對大鼠睪丸組織的影響
    4.4 討論
    4.5 小結
結論
參考文獻
致謝
作者簡介


【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3183145