為建立能同時(shí)快速檢測(cè)牛星狀病毒（BAstV）和牛諾如病毒（BNoV）的方法,本研究根據(jù)BAstV ORF1a基因和BNoV RdRp基因設(shè)計(jì)了2對(duì)特異性引物,通過優(yōu)化反應(yīng)條件,建立了能夠同時(shí)檢測(cè)BAstV和BNoV的雙重PCR方法。特異性試驗(yàn)結(jié)果顯示,該方法對(duì)牛輪狀病毒等5種犢牛腹瀉常見病原的擴(kuò)增結(jié)果均為陰性,僅BAstV和BNoV擴(kuò)增結(jié)果為陽性,特異性較強(qiáng);敏感性試驗(yàn)結(jié)果顯示,該方法對(duì)BAstV和BNoV重組質(zhì)粒的最低檢測(cè)限分別為1.09×10³拷貝/μL和1.42×10³拷貝/μL,敏感性較高;批內(nèi)和批間試驗(yàn)結(jié)果一致,該方法重復(fù)性好。利用該方法和各病原單一PCR方法同時(shí)對(duì)221份河南省犢牛腹瀉糞便樣品進(jìn)行檢測(cè),BAstV和BNoV的陽性檢出率分別為18.1%和9.96%,兩種方法符合率為100%。本研究在國內(nèi)首次建立了檢測(cè)BAstV和BNoV的雙重PCR方法,其特異性強(qiáng),敏感性高,重復(fù)性好,為BAstV和BNoV的鑒別檢測(cè)及其分子流行病學(xué)調(diào)查提供了技術(shù)支持。 

【文章來源】：中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2020,42(08)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：5 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 主要實(shí)驗(yàn)材料
    1.2 引物設(shè)計(jì)與合成
    1.3 單一PCR的擴(kuò)增
    1.4 重組質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)品的構(gòu)建與鑒定
    1.5 雙重PCR反應(yīng)體系及條件的優(yōu)化
    1.6 特異性試驗(yàn)
    1.7 敏感性試驗(yàn)
    1.8 重復(fù)性試驗(yàn)
    1.9 臨床樣品的檢測(cè)
2 結(jié)果
    2.1 重組質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)品的鑒定結(jié)果
    2.2 雙重PCR方法的構(gòu)建及優(yōu)化
    2.3 特異性試驗(yàn)結(jié)果
    2.4 敏感性試驗(yàn)結(jié)果
    2.5 重復(fù)性試驗(yàn)
    2.6 臨床樣品檢測(cè)
3 討論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]犬瘟熱與犬副流感病毒雙重一步法RT-PCR檢測(cè)方法的建立[J]. 趙國清,尹斐斐,安泓霏,王貴升,胡永浩.  中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2018(09)



本文編號(hào)：3181394