布魯氏菌�。˙rucellosis）是一種由布魯氏菌（Brucella）引起的烈性人畜共患傳染病,廣泛流行于全球160多個國家和地區(qū),給世界范圍內(nèi)畜牧業(yè)的發(fā)展和人類的健康帶來了巨大的威脅。目前,布魯氏菌病的診斷方法主要可以分為病原學(xué)診斷和血清學(xué)診斷,但兩類方法各自存在著一些缺點與不足:病原學(xué)診斷存在病原分離操作難度大,分離成功率低,病原培養(yǎng)時間長以及存在一定生物安全風(fēng)險等問題;血清學(xué)診斷則存在凝集抗原容易和多種與布魯氏菌存在相似抗原表位的細菌抗血清（大腸桿菌O157、耶爾森菌O9等）發(fā)生交叉反應(yīng)、不能區(qū)分免疫抗體和感染抗體等問題。microRNA（簡稱miRNA）是一類長約22nt的內(nèi)源性非編碼小分子RNA,廣泛存在于線蟲、果蠅、植物和包括人在內(nèi)的真核生物中。隨著對其研究的深入,人們發(fā)現(xiàn)miRNA可以從細胞內(nèi)釋放,廣泛而穩(wěn)定的存在于包括血清、血漿、唾液、尿液甚至牛奶等細胞外液中,人們將這類miRNA統(tǒng)稱為循環(huán)miRNA（circulating20microRNA）。循環(huán)miRNA具有存在穩(wěn)定、物種間進化保守、檢測方法多樣等特點,并且循環(huán)miRNA作為一種新的疾病診斷標(biāo)志物已經(jīng)在人類醫(yī)學(xué)... 

【文章來源】：中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所北京市

【文章頁數(shù)】：59 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略詞表
第一章 引言
    1.1 布魯氏菌及布魯氏菌病概述
        1.1.1 布魯氏菌及布魯氏菌病
        1.1.2 布魯氏菌病的診斷方法
        1.1.3 布魯氏菌病的防治
    1.2 轉(zhuǎn)錄組學(xué)及轉(zhuǎn)錄組測序技術(shù)概述
    1.3 循環(huán)miRNA概述
        1.3.1 循環(huán)miRNA的發(fā)現(xiàn)
        1.3.2 循環(huán)miRNA的特點
        1.3.3 循環(huán)miRNA的形成與功能
        1.3.4 循環(huán)miRNA的提取與檢測
        1.3.5 循環(huán)miRNA與疾病的診斷
    1.4 本研究目的和意義
第二章 布魯氏菌感染小鼠模型的建立及血清轉(zhuǎn)錄組測序
    2.1 引言
    2.2 材料
        2.2.1 菌株及實驗動物
        2.2.2 主要試劑及耗材
        2.2.3 主要儀器及設(shè)備
    2.3 方法
        2.3.1 細菌的復(fù)蘇和計數(shù)
        2.3.2 布魯氏菌感染BALB/c小鼠
        2.3.3 小鼠脾臟重量和脾臟含菌量測定
        2.3.4 小鼠血清抗體滴度的測定
        2.3.5 小鼠血清轉(zhuǎn)錄組測序
    2.4 結(jié)果
        2.4.1 不同感染時間小鼠脾臟重量變化
        2.4.2 不同感染時間小鼠脾臟含菌量變化
        2.4.3 不同感染時間小鼠血清抗體水平變化
        2.4.4 小鼠血清轉(zhuǎn)錄組測序
    2.5 討論
第三章 小鼠血清轉(zhuǎn)錄組測序數(shù)據(jù)驗證
    3.1 引言
    3.2 材料
        3.2.1 菌株、細胞株及實驗動物
        3.2.2 主要試劑及耗材
        3.2.3 主要儀器及設(shè)備
    3.3 方法
        3.3.1 S1330 感染組與空白對照組小鼠血清轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)驗證
        3.3.2 S2 感染組與空白對照組小鼠血清轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)驗證
        3.3.3 S1330 感染組與S2 感染組小鼠血清轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)驗證
        3.3.4 擴大樣本量驗證mmu-miR-10b-5p
        3.3.5 mmu-miR-10b-5p在小鼠巨噬細胞RAW264.7 中表達水平的探究
        3.3.6 mmu-miR-10b-5p在小鼠巨噬細胞中下游靶點的預(yù)測及驗證
        3.3.7 bta-miR-10b-5p在牛血清中表達水平的探究
    3.4 結(jié)果
        3.4.1 S1330 感染組與空白對照組小鼠血清轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)驗證
        3.4.2 S2 感染組與空白對照組小鼠血清轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)驗證
        3.4.3 S1330 感染組與S2 感染組小鼠血清轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)驗證
        3.4.4 擴大樣本量驗證mmu-miR-10b-5p
        3.4.5 mmu-miR-10b-5p在小鼠巨噬細胞RAW264.7 中表達水平的探究
        3.4.6 mmu-miR-10b-5p在小鼠巨噬細胞中下游靶點的預(yù)測及驗證
        3.4.7 bta-miR-10b-5p在牛血清中表達水平的探究
    3.5 討論
第四章 結(jié)論
    4.1 實驗結(jié)論
    4.2 創(chuàng)新點
參考文獻
致謝
作者簡歷


【參考文獻】：
期刊論文
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[3]三種方法提取血清miRNA效果的比較[J]. 陳昌國,陳秋圓,郭建巍,馬志家,劉敏,趙強元,張雅芳.  檢驗醫(yī)學(xué)與臨床. 2015(20)
[4]循環(huán)microRNA:潛在的疾病診斷生物標(biāo)志物[J]. 焦志軍.  臨床檢驗雜志. 2012(10)
[5]動物中microRNA的保守性和進化歷程[J]. 羅艷,張群,梁宇君,張士璀.  中國科學(xué):生命科學(xué). 2012(02)
[6]TaqMan20MGB探針實時熒光定量PCR快速檢測布魯氏菌[J]. 高正琴,邢進,馮育芳,岳秉飛,賀爭鳴.  中國人獸共患病學(xué)報. 2011(11)
[7]布魯氏菌病的流行情況及危害[J]. 趙鳳菊.  中國畜牧獸醫(yī)文摘. 2011(02)
[8]布魯氏桿菌各類檢測方法的比較[J]. 曾瑞霞,蘇玉虹.  中國畜牧獸醫(yī)文摘. 2007(01)

碩士論文
[1]循環(huán)miRNA內(nèi)參的篩選及驗證[D]. 向夢琴.南華大學(xué) 2015



本文編號：3178422