毛色是山羊重要的經(jīng)濟性狀,同時也是識別動物品種的重要標志,對山羊毛色遺傳規(guī)律的研究,有利于獲得育種目標所確定的或者市場所要求的毛色類型。miRNA是一類內(nèi)源性、單鏈小分子RNA,通過與靶基因互補配對,從而導致靶基因mRNA的降解,抑制蛋白質(zhì)的合成,最終參與機體多種生命活動。但目前這兩者之間的研究較少,本試驗旨在研究毛色相關miRNA及其靶基因在不同品種、不同月齡山羊皮膚中的表達,為探究miRNA對毛色形成的影響機制奠定基礎,為解析毛色相關miRNA在山羊被毛顏色形成中的作用提供參考。首先,本試驗選取飼養(yǎng)在西南大學種羊場的大足黑山羊、內(nèi)蒙古絨山羊以及不同年齡階段（0月齡、2月齡、6月齡和12月齡）的大足黑山羊內(nèi)蒙古絨山羊雜交F₁代山羊各6只,手術法采集其皮膚及毛發(fā)。測定不同品種、不同月齡山羊皮膚及毛發(fā)中黑色素含量以及黑色素在皮膚中的表達部位,同時利用熒光定量PCR測定miRNA及其靶基因在皮膚中的表達情況。之后利用Western20blot及免疫組化研究靶基因在蛋白水平的表達情況及其蛋白在皮膚中的表達部位。主要研究結果如下:1、大足黑山羊皮膚及毛發(fā)中黑色素含量均顯著... 

【文章來源】：西南大學重慶市 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：74 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
常用中英文縮略詞表
第1章 文獻綜述
    1.1 動物毛色與黑色素
        1.1.1 山羊毛色
        1.1.2 黑色素
    1.2 黑色素合成相關信號通路
        1.2.1 cAMP信號通路
        1.2.2 PKC信號通路
        1.2.3 MAPK信號通路
        1.2.4 NO信號通路
        1.2.5 Wnt信號通路
    1.3 黑色素合成重要基因
        1.3.1 TYR
        1.3.2 MITF
        1.3.3 ASIP
    1.4 miRNA與毛色的關系
        1.4.1 miRNA
        1.4.2 毛色相關miRNAs
第2章 引言
    2.1 研究目的與意義
    2.2 技術路線
第3章 試驗材料與方法
    3.1 試驗材料
        3.1.1 試驗動物
        3.1.2 實驗耗材
    3.2 試驗試劑與儀器
        3.2.1 主要藥品和試劑
        3.2.2 主要儀器設備
        3.2.3 主要試劑及其配制成分
    3.3 試驗方法
        3.3.1 試驗組織獲取
        3.3.2 皮膚黑色素提取
        3.3.3 毛發(fā)黑色素提取
        3.3.4 黑色素標準曲線制作
        3.3.5 黑色素染色
        3.3.6 RNA提取(Trizol抽提法)
        3.3.7 c DNA第一條鏈合成及q RT-PCR
        3.3.8 免疫組化
        3.3.9 總蛋白提取、濃度測定
        3.3.10 Western Blotting
        3.3.11 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析
第4章 試驗結果與分析
    4.1 不同品種、不同月齡山羊皮膚采集及其黑色素含量測定
        4.1.1 山羊皮膚及羊毛采集
        4.1.2 不同品種山羊皮膚及毛發(fā)黑色素含量測定
        4.1.3 不同月齡山羊皮膚及毛發(fā)黑色素含量
        4.1.4 不同品種山羊皮膚黑色素染色
        4.1.5 不同月齡山羊皮膚黑色素染色
    4.2 毛色相關miRNAs在不同品種、不同月齡山羊皮膚中的表達
        4.2.1 毛色相關miRNAs的篩選
        4.2.2 miRNA和 U6 的擴增曲線和熔解曲線
        4.2.3 毛色相關miRNAs在不同品種山羊皮膚中的表達
        4.2.4 毛色相關miRNAs在不同月齡山羊皮膚中的表達
    4.3 靶基因在不同品種、不同月齡山羊皮膚中的表達
        4.3.1 miRNAs靶基因預測及篩選
        4.3.2 山羊皮膚RNA完整性檢測
        4.3.3 靶基因在不同品種山羊皮膚中的表達
        4.3.4 靶基因在不同月齡山羊皮膚中的表達
        4.3.5 TYR、MITF蛋白質(zhì)水平表達情況
        4.3.6 TYR蛋白在山羊皮膚中的表達部位
第5章 討論
    5.1 山羊皮膚研磨方法
        5.1.1 皮膚組織結構
        5.1.2 傳統(tǒng)組織研磨方式
    5.2 皮膚毛囊
        5.2.1 毛囊生長規(guī)律
        5.2.2 山羊毛囊周期
    5.3 miRNAs在山羊皮膚中的表達
        5.3.1 miR-129-5p
        5.3.2 miR-148a
        5.3.3 miR-381-3p
        5.3.4 miR-543-3p和 miR-544-5p
    5.4 靶基因在山羊皮膚中的表達
        5.4.1 TYR
        5.4.2 MITF
        5.4.3 EP300
        5.4.4 GSK3β、FZD
        5.4.5 EDN1、PLCB
    5.5 miRNAs與靶基因之間的相互作用
第6章 結論
參考文獻
附錄
致謝
發(fā)表論文一覽表


【參考文獻】：
期刊論文
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博士論文
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碩士論文
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[4]miR-100-5p與FGF21對羊駝黑色素細胞色素生成的調(diào)控[D]. 王瑞瑋.山西農(nóng)業(yè)大學 2018
[5]豬肌內(nèi)脂肪差異性沉積關鍵基因鑒定及AQP3的功能研究[D]. 楊晶.西北農(nóng)林科技大學 2018
[6]大足黑山羊和內(nèi)蒙古絨山羊雜交F1代遺傳特征分析[D]. 張繼攀.西南大學 2018
[7]內(nèi)皮素1（EDN1）對綿羊皮膚黑色素細胞內(nèi)黑色素生成的影響[D]. 龐亞妙.山西農(nóng)業(yè)大學 2015
[8]山羊胎兒皮膚黑色素生成有關miRNA的篩選與鑒定[D]. 孫武.西南大學 2015
[9]絨山羊毛囊周期性變化與興盛期毛囊KAP13-1基因的表達[D]. 李長青.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學 2005



本文編號：3175635