發(fā)布時間：2021-05-07 14:55

　　綿羊肺腺瘤病毒（Jaagsiekte sheep retrovirus,JSRV）為β逆轉(zhuǎn)錄病毒,屬于Retroviridae家族和Othoretrovirinae亞家族。JSRV是綿羊肺腺瘤�。∣PA）的病原,OPA是一種傳染性的綿羊肺癌。JSRV囊膜蛋白（Envelope,Env）主要激活細胞中的PI3K/Akt和MAPK信號通路。研究表明,細胞自噬在很多種類型的癌癥中均受到抑制。細胞的自噬活性往往和腫瘤的惡性發(fā)展程度相反。但是仍沒有關(guān)于自噬形成過程與OPA腫瘤的發(fā)展過程,以及JSRV Env誘導細胞轉(zhuǎn)化的過程之間關(guān)聯(lián)的研究。自噬在JSRV Env轉(zhuǎn)化的細胞中是怎樣受到信號通路調(diào)控的,以及激活的信號通路是否調(diào)控細胞自噬,均值得我們深入探討。本研究檢測了 Akt/mTOR信號通路和MAPK信號通路在自然感染OPA病肺組織、JSRV Env轉(zhuǎn)化的NIH3T3細胞和綿羊絨毛膜滋養(yǎng)層細胞中的激活情況。接著檢測了自噬因子Beclin-1和LC3 Ⅱ/Ⅰ在自然感染OPA肺組織、JSRV Env誘導轉(zhuǎn)化的NIH3T3細胞和綿羊絨毛膜滋養(yǎng)層細胞中的表達水平,并進一步研究了 Beclin-1和LC3... 

【文章來源】：內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學內(nèi)蒙古自治區(qū)

【文章頁數(shù)】：147 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略詞表
1 引言
    1.1 綿羊肺腺瘤概述
        1.1.1 綿羊肺腺瘤病的臨床癥狀、病理學特征以及流行病學概括
        1.1.2 綿羊肺腺瘤病的致瘤機制
    1.2 EGFR簡介
        1.2.1 EGFR信號通路
        1.2.3 EGFR與JSRV的關(guān)系
    1.3 MAPK信號通路簡介
        1.3.1 Ras-Raf-ERK信號通路
        1.3.2 p38 MAPK信號通路
        1.3.3 JNK信號通路
        1.3.4 MAPK信號通路與JSRV的關(guān)系
    1.4 PI3K/Akt/mTOR信號通路簡介
        1.4.1 Akt信號通路
        1.4.2 mTOR信號通路
        1.4.3 Akt/mTOR信號通路與JSRV的關(guān)系
    1.5 細胞自噬簡介
        1.5.1 PI3K/Akt/mTOR信號通路調(diào)控自噬
        1.5.2 MAPK信號通路調(diào)控自噬
        1.5.3 自噬與JSRV的關(guān)系
    1.6 研究目的及意義
    1.7 技術(shù)路線
2 試驗一 自然感染OPA病肺的組織病理學觀察與免疫組織化學檢測
    2.1 材料與方法
        2.1.1 試驗材料
        2.1.2 儀器設(shè)備
        2.1.3 試驗試劑
        2.1.4 試驗方法
    2.2 試驗結(jié)果
        2.2.1 OPA病肺的組織病理學觀察結(jié)果
        2.2.2 OPA病肺組織中JSRV Env的表達定位結(jié)果
    2.3 討論
    2.4 小結(jié)
3 試驗二 EGFR在自然感染OPA病肺組織中表達的檢測
    3.1 材料與方法
        3.1.1 試驗材料
        3.1.2 儀器設(shè)備
        3.1.3 試驗試劑
        3.1.4 試驗方法
    3.2 試驗結(jié)果
        3.2.1 OPA病肺組織中EGFR的表達定位結(jié)果
        3.2.2 OPA病肺組織中EGFR的蛋白表達檢測結(jié)果
        3.2.3 討論
        3.2.4 小結(jié)
4 試驗三 MAPK和Akt/mTOR通路在自然感染OPA病肺組織中表達的檢測
    4.1 材料與方法
        4.1.1 試驗材料
        4.1.2 儀器設(shè)備
        4.1.3 試驗試劑
        4.1.4 試驗方法
    4.2 試驗結(jié)果
        4.2.1 OPA病肺組織中MAPK通路的表達定位結(jié)果
        4.2.2 OPA病肺組織中MAPK通路的磷酸化水平檢測結(jié)果
        4.2.3 OPA病肺組織中Akt/mTOR通路的表達定位結(jié)果
        4.2.4 OPA病肺組織中Akt/mTOR通路的磷酸化水平檢測結(jié)果
        4.2.5 討論
        4.2.6 小結(jié)
5 試驗四 Beclin-1和LC31Ⅱ/Ⅰ在自然感染OPA病肺組織中表達的檢測
    5.1 材料與方法
        5.1.1 試驗材料
        5.1.2 儀器設(shè)備
        5.1.3 試驗試劑
        5.1.4 試驗方法
    5.2 試驗結(jié)果
        5.2.1 OPA病肺組織中Beclin-1和LC3基因表達檢測結(jié)果
        5.2.2 OPA病肺組織中Beclin-1和LC3表達定位結(jié)果
        5.2.3 OPA病肺組織中Beclin-1和LC3蛋白表達檢測結(jié)果
        5.2.4 討論
        5.2.5 小結(jié)
6 試驗五 EGFR在JSRV Env誘導轉(zhuǎn)化的細胞系中表達的檢測
    6.1 材料與方法
        6.1.1 試驗材料
        6.1.2 儀器設(shè)備
        6.1.3 試驗試劑
        6.1.4 試驗方法
    6.2 試驗結(jié)果
        6.2.1 重組表達質(zhì)粒最佳轉(zhuǎn)染效率的測定結(jié)果
        6.2.2 NIH3T3細胞中env基因表達檢測結(jié)果
        6.2.3 NIH3T3細胞中Env蛋白表達檢測結(jié)果
        6.2.4 NIH3T3細胞中EGFR的蛋白表達檢測結(jié)果
        6.2.5 絨毛膜滋養(yǎng)層細胞中env基因表達檢測結(jié)果
        6.2.6 絨毛膜滋養(yǎng)層細胞中Env蛋白表達檢測結(jié)果
        6.2.7 絨毛膜滋養(yǎng)層細胞中EGFR的蛋白表達檢測結(jié)果
        6.2.8 討論
        6.2.9 小結(jié)
7 試驗六 MAPK和Akt/mTOR通路在JSRV Env誘導轉(zhuǎn)化的細胞系中的表達
    7.1 材料與方法
        7.1.1 試驗材料
        7.1.2 儀器設(shè)備
        7.1.3 試驗試劑
        7.1.4 試驗方法
    7.2 試驗結(jié)果
        7.2.1 NIH3T3細胞中MAPK通路的檢測結(jié)果
        7.2.2 NIH3T3細胞中Akt/mTOR通路的檢測結(jié)果
        7.2.3 滋養(yǎng)層細胞中MAPK通路的檢測結(jié)果
        7.2.4 滋養(yǎng)層細胞中Akt/mTOR通路的檢測結(jié)果
        7.2.5 討論
        7.2.6 小結(jié)
8 試驗七 Beclin-1和LC3Ⅱ/Ⅰ在JSRV-Env誘導轉(zhuǎn)化的細胞系中表達的檢測
    8.1 材料與方法
        8.1.1 試驗材料
        8.1.2 儀器設(shè)備
        8.1.3 試驗試劑
        8.1.4 試驗方法
    8.2 試驗結(jié)果
        8.2.1 NIH3T3細胞中Beclin-1和LC3Ⅱ/Ⅰ的表達檢測結(jié)果
        8.2.2 滋養(yǎng)層細胞中Beclin-1和LC3Ⅱ/Ⅰ的表達檢測結(jié)果
        8.2.3 討論
        8.2.4 小結(jié)
9 試驗八 MAPK和Akt/mTOR通路調(diào)控Beclin-1和LC3Ⅱ/Ⅰ的表達機制
    9.1 材料與方法
        9.1.1 試驗材料
        9.1.2 儀器設(shè)備
        9.1.3 試驗試劑
        9.1.4 試驗方法
    9.2 試驗結(jié)果
        9.2.1 抑制劑條件摸索結(jié)果
        9.2.2 NIH3T3細胞中Beclin-1和LC3的基因表達檢測結(jié)果
        9.2.3 NIH3T3細胞中Beclin-1和LC3Ⅱ/Ⅰ的蛋白表達檢測結(jié)果
        9.2.4 絨毛膜滋養(yǎng)層細胞中Beclin-1和LC3Ⅱ/Ⅰ的基因表達檢測結(jié)果
        9.2.5 絨毛膜滋養(yǎng)層細胞中Beclin-1和LC3Ⅱ/Ⅰ的蛋白表達檢測結(jié)果
        9.2.6 討論
        9.2.7 小結(jié)
10 結(jié)論
致謝
參考文獻
作者簡介


【參考文獻】：
期刊論文
[1]Ras/Raf/MEK/ERK信號通路參與自噬調(diào)控作用的研究進展[J]. 王雪,張評滸.  中國藥科大學學報. 2017(01)
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博士論文
[1]JSRV囊膜蛋白及其亞基誘導NIH 3T3細胞轉(zhuǎn)化與分子發(fā)生機制的研究[D]. 劉暢.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學 2014
[2]JSRV檢測及JSRV轉(zhuǎn)錄起始調(diào)節(jié)基因LTR致瘤機制相關(guān)性研究[D]. 羅軍榮.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學 2009

碩士論文
[1]RN181通過p38-MAPK對肝癌細胞HepG2凋亡及自噬的影響[D]. 謝瑤.南華大學 2016



本文編號：3173591