發(fā)布時間：2021-05-07 09:20

　　為建立肉雞成肌細胞的體外分離、培養(yǎng)及鑒定體系,選取11d雞胚為材料,利用Ⅰ型膠原酶消化雞胚胸肌,差速貼壁法分離純化成肌細胞,優(yōu)化成肌細胞培養(yǎng)條件;通過細胞形態(tài)學觀察和成肌分化標志基因表達情況進行細胞鑒定,并利用含2%馬血清的培養(yǎng)基誘導其成肌分化。結果表明:分離獲得的細胞貼壁后呈紡錘形,39.5℃培養(yǎng)條件下細胞增殖速度顯著高于37.0℃（P<0.05）;經(jīng)實時熒光定量PCR（RT-qPCR）檢測分析,增殖期與分化期均有成肌細胞的特異性標志基因成肌因子5（Myogenic factor 5,Myf5）與成肌分化因子1（Myogenic differentiation 1,MyoD）的表達,且與增殖期相比,成肌細胞分化期肌細胞生成素（Myogenin,MyoG）與肌肉調節(jié)因子4（Muscle regulatory factor,MRF4）基因表達量顯著升高（P<0.05）;此外,細胞增殖期結蛋白（Desmin）和分化期肌球蛋白重鏈（Myosin heavy chain,MyHC）呈陽性表達。綜上,成功分離獲得了肉雞成肌細胞,并在39.5℃培養(yǎng)條件下具有更好的增殖能力,為研究肌肉發(fā)... 

【文章來源】：中國農業(yè)大學學報. 2020,25(09)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：8 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 試驗材料
    1.2 試驗方法
        1.2.1 主要培養(yǎng)基配制
        1.2.2 成肌細胞的分離
        1.2.3 成肌細胞的純化培養(yǎng)
        1.2.4 成肌細胞適宜培養(yǎng)溫度的確定
        1.2.5 成肌細胞的成肌誘導分化
        1.2.6 成肌細胞增殖及分化階段特異性表達基因鑒定
        1.2.7 成肌細胞Desmin與成肌誘導分化后MyHC免疫熒光鑒定
    1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析
2 結果與分析
    2.1 成肌細胞的分離純化及形態(tài)特征
    2.2 成肌細胞在不同溫度培養(yǎng)條件下的增殖曲線
    2.3 成肌細胞增殖及分化階段特異性表達基因的相對表達量分析
    2.4 成肌細胞標志蛋白Desmin的表達檢測
    2.5 成肌細胞的誘導分化后標志蛋白MyHC的表達檢測
3 討論
    3.1 成肌細胞的分離方法
    3.2 成肌細胞的純化方法
    3.3 成肌細胞的增殖培養(yǎng)條件和成肌分化培養(yǎng)條件
    3.4 成肌細胞及其誘導分化
4 結論


【參考文獻】：
期刊論文
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[2]成肌細胞原代培養(yǎng)及臨床應用前景[J]. 邱裕佳,王偉.  生物骨科材料與臨床研究. 2017(02)
[3]綿羊成肌細胞的純化、培養(yǎng)、鑒定及其成肌誘導分化研究[J]. 王紅娜,張英杰,劉月琴.  河北農業(yè)大學學報. 2016(01)
[4]豬骨骼肌MyHC-Ⅱb基因上調表達的分子機制[J]. 張琪,杜胭脂,王鵬飛,李艷平,王力圓,李毅,孫億,姜運良.  中國科學:生命科學. 2015(01)
[5]乳兔成骨細胞原代培養(yǎng)與鑒定:改良膠原酶與胰酶的分段消化[J]. 楊森,馮付明,王銀輝.  中國組織工程研究. 2014(38)
[6]育雛期肉雞的發(fā)育特點[J]. 劉莉娟.  畜牧獸醫(yī)雜志. 2014(05)
[7]水溶性苜蓿多糖對肉仔雞T、B淋巴細胞體外增殖的影響[J]. 劉晴雪,董曉芳,佟建明,徐春燕,王俊麗,張琪.  畜牧獸醫(yī)學報. 2010(09)
[8]成肌細胞及其在骨骼肌研究中的應用[J]. 潘紅英,徐曉陽.  中國組織工程研究與臨床康復. 2007(10)

博士論文
[1]豬骨骼肌來源成肌和成脂細胞分化差異的分子機制[D]. 孫文娟.中國農業(yè)大學 2017



本文編號：3173148