犬皰疹病毒（Canine herpesvirus,CHV）感染僅存在于犬中,是新生幼犬的急性、非發(fā)熱型致死性疾病。由US6基因編碼的gD糖蛋白是皰疹病毒囊膜上的重要組成部分,它具有識(shí)別各自紅細(xì)胞的能力,使各個(gè)皰疹病毒都有自己的特征。因此,本研究根據(jù)自然發(fā)病犬的臨床癥狀、聚合酶鏈反應(yīng)（polymerase chain reaction,PCR）、病毒的分離和純化、動(dòng)物回歸實(shí)驗(yàn)和基因生物信息學(xué)分析的實(shí)驗(yàn)手段證實(shí)了該疾病為CHV感染所致,另外,對(duì)US6基因編碼的gD糖蛋白的主要抗原區(qū)域進(jìn)行分析并構(gòu)建了表達(dá)載體。試驗(yàn)結(jié)果如下:1.從病犬肝臟中提取的DNA經(jīng)PCR擴(kuò)增,檢測(cè)出大小為357 bp的目的條帶,經(jīng)NCBI的Blast比對(duì)驗(yàn)證該病毒為CHV,毒株命名為CHV-JX株,并測(cè)得該病毒的TCID₅₀為10^-4.39/0.1mL;該病毒感染的犬腎細(xì)胞（Madin-Darby canine kidney,MDCK）在電鏡下可看到圓形的病毒粒子,細(xì)胞出現(xiàn)了空泡化;在顯微鏡下,可以看到24h內(nèi)細(xì)胞開(kāi)始出現(xiàn)圓縮、變暗,逐漸向周?chē)鷶U(kuò)散,最后細(xì)胞脫落。將CHV-J... 

【文章來(lái)源】：江西農(nóng)業(yè)大學(xué)江西省

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮寫(xiě)詞表
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 皰疹病毒
        1.1.1 皰疹病毒的形態(tài)特征
        1.1.2 皰疹病毒基因編碼的蛋白
        1.1.3 皰疹病毒的復(fù)制
    1.2 犬皰疹病毒概述
        1.2.1 病原學(xué)
        1.2.2 流行病學(xué)
        1.2.3 臨床癥狀
        1.2.4 病理學(xué)特征
        1.2.5 診斷方法
        1.2.6 治控方案
    1.3 研究的目的及意義
第二章 犬皰疹病毒的分離鑒定
    2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 實(shí)驗(yàn)材料
            2.1.1 樣本來(lái)源
            2.1.2 細(xì)胞
            2.1.3 質(zhì)粒及菌株
            2.1.4 引物
            2.1.5 試劑與耗材
            2.1.6 儀器設(shè)備
        2.2 犬皰疹病毒的分離鑒定
            2.2.1 病毒的分離培養(yǎng)
            2.2.2 細(xì)胞的復(fù)蘇
            2.2.3 MDCK傳代細(xì)胞培養(yǎng)法
            2.2.4 細(xì)胞的凍存
            2.2.5 細(xì)胞攻毒及病毒的繁殖
            2.2.6 MDCK細(xì)胞半數(shù)感染量(TCID50)的測(cè)定
            2.2.7 病毒的鑒定
        2.3 幼犬回歸試驗(yàn)
        2.4 犬皰疹病毒對(duì)MDCK細(xì)胞的影響
    3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.1 PCR檢測(cè)結(jié)果
        3.2 犬腎細(xì)胞半數(shù)感染量(TCID50)結(jié)果
        3.3 感染細(xì)胞電鏡結(jié)果
        3.4 細(xì)胞病變結(jié)果
        3.5 幼犬回歸試驗(yàn)結(jié)果
        3.6 CHV對(duì)MDCK細(xì)胞的影響
            3.6.1 CHV對(duì)MDCK細(xì)胞凋亡的影響
            3.6.2 CHV對(duì)MDCK細(xì)胞線粒體膜電位的影響
            3.6.3 CHV對(duì)MDCK細(xì)胞ROS的影響
            3.6.4 CHV對(duì)MDCK細(xì)胞p H值的影響
    4 討論
        4.1 犬皰疹病毒的流行病學(xué)特點(diǎn)
        4.2 皰疹病毒對(duì)MDCK細(xì)胞的損傷
第三章 犬皰疹病毒US6基因的生物信息學(xué)分析
    3.
        3.1 試劑準(zhǔn)備
        3.2 US6全基因擴(kuò)增
        3.3 PCR產(chǎn)物的膠回收純化
        3.4 構(gòu)建重組質(zhì)粒
            3.4.1 連接
            3.4.2 轉(zhuǎn)化
            3.4.3 提取重組質(zhì)粒
        3.5 犬皰疹病毒US6基因的序列分析
        3.6 US6基因的核苷酸序列的同源性分析
        3.7 US6基因推導(dǎo)的氨基酸序列分析
        3.8 gD蛋白的結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)
        3.9 gD蛋白的抗原性分析
        3.10 犬皰疹病毒gD蛋白主要抗原區(qū)域的原核表達(dá)載體的制備
    4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        4.1 US6全基因凝膠電泳結(jié)果
        4.2 gD蛋白保守區(qū)域分析結(jié)果
        4.3 US6基因遺傳進(jìn)化樹(shù)和同源性分析結(jié)果
        4.4 US6基因的核苷酸序列校對(duì)后ORF預(yù)測(cè)結(jié)果
        4.5 gD蛋白氨基酸序列的信號(hào)肽預(yù)測(cè)
        4.6 gD蛋白氨基酸序列的跨膜區(qū)域預(yù)測(cè)
        4.7 gD蛋白氨基酸序列的N糖基化位點(diǎn)預(yù)測(cè)
        4.8 gD蛋白氨基酸序列抗原性分析
        4.9 犬皰疹病毒主要抗原區(qū)域的表達(dá)
            4.9.1 犬皰疹病毒CHV-JX株US6基因主要抗原區(qū)域的全基因合成
            4.9.2 主要抗原區(qū)域的全基因合成及表達(dá)載體的構(gòu)建與鑒定
    5 討論
第四章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
文章的創(chuàng)新與不足
攻讀碩士期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文
致謝
附錄


【參考文獻(xiàn)】：
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碩士論文
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