偽狂犬�。≒seudorabies,PR）是由偽狂犬病病毒（Pseudorabies virus,PRV）感染引起的一種烈性傳染病,豬被認(rèn)為是PRV的自然宿主和主要傳染源,免疫接種弱毒疫苗是防控PR的有效途徑之一。二基因缺失（US7/US8缺失）和三基因缺失（US7/US8/UL23）的PRV弱毒疫苗廣泛應(yīng)用于豬偽狂犬病防控,取得了較好的免疫效果。近年來(lái),在我國(guó)山東、河北、遼寧和北京等地相繼報(bào)道犬、水貂等毛皮動(dòng)物通過(guò)接觸接種弱毒疫苗豬的生肉或內(nèi)臟而導(dǎo)致感染PRV,表現(xiàn)為搔癢、發(fā)熱、呼吸系統(tǒng)障礙和消化系統(tǒng)功能紊亂。犬接種上述弱毒疫苗后發(fā)現(xiàn),弱毒疫苗毒株可在犬群中水平傳播且對(duì)犬致病。雖然偽狂犬缺失疫苗對(duì)豬是安全的,但免疫接種后,在豬群中未被完全清除,而犬等毛皮動(dòng)物通過(guò)接觸免疫豬的生肉或內(nèi)臟而感染發(fā)病,對(duì)犬等毛皮動(dòng)物仍然具有高致病性。目前廣泛使用的偽狂犬疫苗對(duì)犬存在安全問(wèn)題,亟待進(jìn)一步改進(jìn),降低其毒力。US3基因?yàn)榘捳畈《镜牧硪恢匾亩玖?對(duì)調(diào)控細(xì)胞凋亡和和調(diào)節(jié)宿主免疫反應(yīng)等也起到關(guān)鍵的作用。本研究應(yīng)用CRISPR/Cas9技術(shù)以r PRV^{del US7/US8/UL23}

【文章來(lái)源】：中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京市

【文章頁(yè)數(shù)】：53 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
主要符號(hào)對(duì)照表
第一章 緒論
    1.1 偽狂犬病
        1.1.1 偽狂犬病病毒
        1.1.2 病毒分子生物學(xué)特征
        1.1.3 病原學(xué)
        1.1.4 臨床癥狀
        1.1.5 流行病學(xué)
        1.1.6 疫苗研究進(jìn)展
    1.2 CRISPR/Cas9 基因編輯技術(shù)
        1.2.1 CRISPR/Cas9 簡(jiǎn)介
        1.2.2 CRISPR/Cas9 工作原理
        1.2.3 CRISPR/Cas9 技術(shù)應(yīng)用
    1.3 研究目的與意義
第二章 US7/US8/UL23/US3 四基因缺失重組偽狂犬病毒的構(gòu)建
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        2.1.2 毒株、細(xì)胞和質(zhì)粒
        2.1.3 主要試劑
        2.1.4 主要儀器
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 US3基因的PCR擴(kuò)增
        2.2.2 US3基因原核表達(dá)載體的構(gòu)建
        2.2.3 US3蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)
        2.2.4 US3蛋白多克隆抗體的制備
        2.2.5 引物合成及sgRNA的設(shè)計(jì)
        2.2.6 sgRNA質(zhì)粒的構(gòu)建
        2.2.7 rPRVdel US7/US8/UL23 病毒基因組的提取
        2.2.8 sg RNA質(zhì)粒與rPRVdel US7/US8/UL23 病毒基因組共轉(zhuǎn)染
    2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.3.1 US3基因的PCR擴(kuò)增
        2.3.2 US3基因原核表達(dá)載體的構(gòu)建
        2.3.3 US3蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)
        2.3.4 US3蛋白多克隆抗體的鑒定
        2.3.5 引物合成及sgRNA的設(shè)計(jì)
        2.3.6 sgRNA質(zhì)粒的構(gòu)建
        2.3.7 rPRVdel US7/US8/UL23 病毒基因組的PCR鑒定
        2.3.8 US7/US8/UL23/US3 四基因缺失重組偽狂犬病毒的鑒定
    2.4 討論
第三章 RPRVDELUS7/US8/UL23/US3 生物學(xué)特性及致病性分析
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        3.1.2 主要試劑
        3.1.3 主要儀器
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 rPRVdel US7/US8/UL23/US3 遺傳穩(wěn)定性
        3.2.2 rPRVdel US7/US8/UL23/US3 生長(zhǎng)動(dòng)力學(xué)
        3.2.3 rPRVdel US7/US8/UL23/US3 致病性分析
    3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.3.1 rPRVdel US7/US8/UL23/US3 遺傳穩(wěn)定性
        3.3.2 rPRVdel US7/US8/UL23/US3 生長(zhǎng)動(dòng)力學(xué)
        3.3.3 rPRVdel US7/US8/UL23/US3 致病性分析
    3.4 討論
全文結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡(jiǎn)歷



本文編號(hào)：3169667