引起奶牛乳腺炎的原因復(fù)雜多樣,金黃色葡萄球菌是其中重要的病原之一。目前生產(chǎn)上針對(duì)金黃色葡萄球菌引發(fā)的奶牛乳腺炎的防治有抗生素、中草藥以及滅活疫苗等,但是抗生素的過(guò)度使用會(huì)產(chǎn)生耐藥性甚至“抗性奶”,危害公共衛(wèi)生和人類身體健康,而中草藥治療用量大,成本高,滅活疫苗等預(yù)防效果也不理想。隨著分子生物學(xué)和免疫學(xué)的發(fā)展,抗體制劑受到越來(lái)越多研究者的親睞,尤其是小分子單鏈抗體,不僅保留了“Y”形抗體完整的抗原結(jié)合位點(diǎn),且具有分子量小,免疫原性低,組織穿透能力強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn),也備受大家關(guān)注。為探尋治療奶牛乳腺炎的抗生素替代性生物制劑,本研究將其原核表達(dá)產(chǎn)物已顯示具有一定治療效果的8個(gè)針對(duì)牛源金黃色葡萄球菌單鏈抗體（scFv）的編碼基因插入到pcDNA3.1（+）,構(gòu)建真核表達(dá)質(zhì)粒pcDNA3.1-scFv。首先驗(yàn)證單鏈抗體真核質(zhì)粒的表達(dá)特性,將其注入小鼠乳腺內(nèi),經(jīng)Western blot驗(yàn)證真核質(zhì)粒從第1 d開始表達(dá),第5 d達(dá)到表達(dá)高峰,在此基礎(chǔ)上繼續(xù)研究真核表達(dá)scFv對(duì)小鼠乳腺炎的治療作用。具體方法是將混合的真核表達(dá)質(zhì)粒經(jīng)第四對(duì)乳腺導(dǎo)管注入到處于泌乳期的乳腺炎模型小鼠的乳腺中,以通過(guò)scFv在小鼠乳腺... 

【文章來(lái)源】：上海交通大學(xué)上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：80 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
符號(hào)說(shuō)明
第一章 緒論
    1.1 奶牛乳腺炎的感染及發(fā)病機(jī)理
        1.1.1 奶牛乳腺炎的危害
        1.1.2 奶牛乳腺炎的病原
        1.1.3 奶牛乳腺炎的發(fā)病機(jī)理
    1.2 奶牛乳腺炎的診斷研究現(xiàn)狀
    1.3 奶牛乳腺炎的防治研究進(jìn)展
        1.3.1 抗生素治療
        1.3.2 中草藥治療
        1.3.3 抗微生物制劑治療
        1.3.4 加強(qiáng)日常管理
        1.3.5 目前防治奶牛乳腺炎方法的一些弊端
    1.4 單鏈抗體的研究進(jìn)展
        1.4.1 scFv介紹
        1.4.2 scFv的噬菌體展示
        1.4.3 scFv的真核表達(dá)
        1.4.4 scFv的應(yīng)用
    1.5 本實(shí)驗(yàn)室研究基礎(chǔ)
    1.6 本論文研究的目的及意義
第二章 牛源抗金黃色葡萄球菌SCFV真核質(zhì)粒的構(gòu)建及其在小鼠乳腺內(nèi)的表達(dá)時(shí)效研究
    2.1 材料
        2.1.1 菌種和質(zhì)粒
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        2.1.3 主要試劑與儀器
    2.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的分組和處理
    2.3 實(shí)驗(yàn)方法
        2.3.1 scFv的引物設(shè)計(jì)
        2.3.2 PCR擴(kuò)增目的基因
        2.3.3 目的基因與pMD-18-T連接
        2.3.4 轉(zhuǎn)化
        2.3.5 質(zhì)粒提取
        2.3.6 pMD-18-T-scFv質(zhì)粒雙酶切鑒定
        2.3.7 重組真核質(zhì)粒（pcDNA3.1-scFv）的構(gòu)建
        2.3.8 pET-28a-scFv的原核表達(dá)蛋白的誘導(dǎo)
        2.3.9 蛋白的分離、純化
        2.3.10 兔抗牛源scFv多克隆抗體制備
        2.3.11 兔抗牛源scFv多克隆抗體ELISA效價(jià)測(cè)定
        2.3.12 pcDNA3.1-scFv重組質(zhì)粒的無(wú)內(nèi)毒素提取
        2.3.13 Western-blot驗(yàn)證重組質(zhì)粒在小鼠乳腺內(nèi)的表達(dá)時(shí)效
    2.4 結(jié)果
        2.4.1 pcDNA3.1-scFv重組質(zhì)粒的構(gòu)建及鑒定
        2.4.2 pcDNA3.1-scFv真核重組質(zhì)粒在小鼠乳腺內(nèi)的表達(dá)時(shí)效
    2.5 討論
    2.6 本章小結(jié)
第三章 牛源抗金黃色葡萄球菌單鏈抗體防治小鼠乳腺炎的研究
    3.1 材料
        3.1.1 菌株和質(zhì)粒
        3.1.2 主要試劑與儀器
        3.1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
    3.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的分組和處理
        3.2.1 pcDNA3.1-scFv真核表達(dá)質(zhì)粒針對(duì)小鼠乳腺炎的預(yù)防研究
        3.2.2 pcDNA3.1-scFv真核表達(dá)質(zhì)粒針對(duì)小鼠乳腺炎的治療研究
    3.3 實(shí)驗(yàn)方法
        3.3.1 乳腺組織細(xì)菌計(jì)數(shù)
        3.3.2 乳腺組織病理切片
        3.3.3 小鼠的乳腺組織細(xì)胞因子檢測(cè)（TNF-α、IL6和IL17）
    3.4 結(jié)果
        3.4.1 pcDNA3.1-scFv真核表達(dá)質(zhì)粒針對(duì)小鼠乳腺炎的預(yù)防研究結(jié)果
        3.4.2 pcDNA3.1-scFv真核表達(dá)質(zhì)粒針對(duì)小鼠乳腺炎的治療研究結(jié)果
    3.5 討論
    3.6 本章小結(jié)
第四章 牛源抗金黃色葡萄球菌SCFV針對(duì)奶牛隱性乳腺炎的治療研究
    4.1 材料
        4.1.1 質(zhì)粒
        4.1.2 主要試劑與儀器
    4.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組
    4.3 實(shí)驗(yàn)方法
        4.3.1 奶樣細(xì)菌計(jì)數(shù)
        4.3.2 CMT檢測(cè)和效果判定標(biāo)準(zhǔn)
        4.3.3 生物安全性評(píng)價(jià)
        4.3.4 乳樣、尿樣和糞樣基因組的提取
    4.4 結(jié)果
        4.4.1 奶樣細(xì)菌計(jì)數(shù)結(jié)果
        4.4.2 奶樣CMT檢測(cè)結(jié)果
        4.4.3 生物安全性評(píng)價(jià)結(jié)果
    4.5 討論
    4.6 本章小結(jié)
第五章 全文結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝
攻讀碩士學(xué)位期間已發(fā)表或錄用的論文


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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碩士論文
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本文編號(hào)：3159061