目前利用奶牛子宮內膜上皮細胞體外培養(yǎng)技術,建立奶牛子宮內膜炎模型從而減少不可控因素來研究奶牛子宮內膜炎疾病已成為國內外普遍使用的一類方法,因此獲得高純度、同一性的子宮內膜上皮細胞是體外研究的關鍵環(huán)節(jié),國內外所使用方法主要是酶消化法、組織塊貼壁法和組織塊消化貼壁法。本文旨對先前的方法進行改良,建立一種簡便易行、培養(yǎng)周期短、細胞活性及形態(tài)良好的原代奶牛子宮內膜上皮細胞體外培養(yǎng)技術。采用健康未孕奶牛子宮為試驗材料,取下子宮內膜組織,加入5 mL含2%雙抗、40%胰酶的DMEM/F12培養(yǎng)基,4℃消化12 h,再將組織移至25 cm²細胞培養(yǎng)瓶中貼壁培養(yǎng)。獲得原代細胞后,應用角蛋白-18抗體對細胞進行免疫組化熒光鑒定,并對第3代細胞采用CCK-8法測定不同時間點的D_{450 nm}值,繪制細胞生長曲線。結果顯示,培養(yǎng)至第8天,原代細胞基本鋪滿細胞培養(yǎng)瓶瓶底,有效地縮短了常規(guī)組織塊貼壁法的周期。通過角蛋白-18免疫組化熒光鑒定,原代上皮細胞的陽性率可達98%以上,相比常規(guī)組織塊貼壁法來說,純度明顯提高,省去了細胞純化的操作步驟。細胞增殖狀態(tài),符合正常的分裂... 

【文章來源】：中國畜牧獸醫(yī). 2020,47(03)北大核心

【文章頁數(shù)】：7 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
        1.1.1 試驗動物
        1.1.2 主要試劑
        1.1.3 主要儀器
    1.2 方法
        1.2.1 原代培養(yǎng)
        1.2.2 傳代
        1.2.3 鑒定
        1.2.4 生長曲線
        1.2.5 數(shù)據(jù)分析
2 結 果
    2.1 細胞生長情況
    2.2 細胞傳代情況
    2.3 細胞角蛋白-18鑒定情況
    2.4 生長曲線情況
3 討 論
4 結 論


【參考文獻】：
期刊論文
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[7]奶牛子宮內膜上皮細胞體外培養(yǎng)及鑒定[J]. 都日塔哈拉,曹金山,高龍,付長其,郭羽麗.  中國畜牧獸醫(yī). 2016(06)
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[10]奶牛和綿羊子宮內膜細胞體外培養(yǎng)方法的研究[J]. 陳利平,樸學嬌,羅永,倪和民,劉云海,郭勇.  中國農學通報. 2012(14)

博士論文
[1]奶牛子宮內膜炎早期診斷及益生菌抗大腸桿菌誘導的子宮內膜上皮細胞炎性損傷作用機理[D]. 劉明超.中國農業(yè)大學 2017



本文編號：3157537