副豬嗜血桿菌（Haemophilus parasuis, HPS）是健康豬上呼吸道的一種共棲菌，在特定條件下侵入機體而引起革拉瑟氏�。℅l sser’s disease），以纖維素性多發(fā)性漿膜炎、關(guān)節(jié)炎和腦膜炎為特征，對養(yǎng)豬業(yè)危害嚴重并造成巨大的經(jīng)濟損失。HPS血清型眾多，有很多無法定型的菌株，不同血清型之間的交叉保護力差，所以商品化疫苗在目前不能起到良好的保護作用，這與HPS毒力因子未知以及保護性抗原認識不清楚有一定關(guān)系。目前單價和多價滅活苗用于預防和治療HPS，但效果并不理想。有文獻報道，亞單位疫苗對防治HPS具有很好的前景和潛力。因此，本研究對HPS主要保護性抗原進行免疫效力評價，篩選疫苗候選抗原，以期為HPS的亞單位疫苗的研制和副豬嗜血桿菌病的診斷奠定基礎。自轉(zhuǎn)運三聚體蛋白VtaA與HPS的毒力有關(guān)。在HPS血清5型Nagasaki株基因組中共有13個拷貝的vtaA基因，其中vtaA1基因與其它拷貝等具有較高的同源性。本研究將vtaA1基因編碼序列分段進行表達，即N端vtaA1N、C端vtaA1C和中間區(qū)段vtaA1M。HktE（過氧化氫酶）和AfuA（Fe3+轉(zhuǎn)運蛋白）是本實... 

【文章來源】：黑龍江八一農(nóng)墾大學黑龍江省

【文章頁數(shù)】：62 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
目錄
符號說明
第一章 文獻綜述
    1.1 副豬嗜血桿菌概述
        1.1.1 病原學
        1.1.2 病理學
        1.1.3 致病機理
        1.1.4 血清型
        1.1.5 流行病學
        1.1.6 基因分型
        1.1.7 毒力因子
    1.2 HPS 的治療與防制
    1.3 HPS 疫苗研究進展
    1.4 本試驗的目的與意義
第二章 副豬嗜血桿菌主要抗原基因的克隆與原核表達
    2.1 材料
        2.1.1 菌種、載體、血清
        2.1.2 主要試劑與藥品
        2.1.3 主要試驗儀器
    2.2 方法
        2.2.1 引物的設計與合成
        2.2.2 HPS 血清 5 型標準菌株 Nagasaki 基因組的提取
        2.2.3 afuA 基因、HktE 基因、VtaA1C 基因、VtaA1M 基因和 VtaA1N 基因的重組表達質(zhì)粒的構(gòu)建與鑒定
        2.2.4 重組表達質(zhì)粒的誘導表達、鑒定及純化
        2.2.5 重組蛋白濃度的測定
        2.2.6 重組蛋白的 western blot 鑒定
    2.3 結(jié)果
        2.3.1 目的基因擴增結(jié)果
        2.3.2 重組質(zhì)粒的酶切鑒定結(jié)果
        2.3.3 重組蛋白的純化結(jié)果
        2.3.4 重組蛋白的 western blot 鑒定
    2.4 討論
第三章 副豬嗜血桿菌重組蛋白免疫效果評價
    3.1 材料
        3.1.1 菌種和質(zhì)粒
        3.1.2 試驗動物
        3.1.3 主要試劑
        3.1.4 主要試驗儀器
    3.2. 方法
        3.2.1 小鼠免疫試驗
        3.2.2 小鼠脾淋巴細胞增殖試驗
        3.2.3 免疫指標檢測
        3.2.4 小鼠攻毒試驗
        3.2.5 攻毒后小鼠各臟器菌落數(shù)測定
    3.3 結(jié)果
        3.3.1 血清中 IgG 檢測結(jié)果
        3.3.2 IgG1、IgG2a 抗體滴度檢測結(jié)果
        3.3.3 小鼠脾臟 T 淋巴細胞增殖實驗結(jié)果
        3.3.4 細胞因子檢測結(jié)果
        3.3.5 攻毒保護性試驗結(jié)果
        3.3.6 攻毒后存活小鼠各臟器菌落數(shù)
    3.4 討論
結(jié)論
參考文獻
致謝
附錄
個人簡歷


【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3148285