為建立犬瘟熱病毒（CDV）臨床快速檢測方法,針對CDV保守N基因依據(jù)重組酶聚合酶等溫擴增（RPA）引物設計原理進行RPA引物探針設計,通過反應條件優(yōu)化、敏感性試驗、特異性試驗和臨床樣品檢測,建立了CDV實時熒光RT-RPA檢測方法。結果顯示,反應體系中M-MLV反轉錄酶最適濃度為4 U/μL,所建CDV實時熒光RT-RPA檢測方法特異性較好,敏感性最低可檢測到5.68×10² copies/μL,高于國標RT-PCR（GB/T 27532-2011）檢測方法。建立的CDV實時熒光RT-RPA檢測方法具有較高的敏感性和特異性、操作簡便、20 min內(nèi)判定結果,可用于臨床犬瘟熱快速診斷,對犬瘟熱的防控具有重要意義。 

【文章來源】：動物醫(yī)學進展. 2020,41(11)北大核心

【文章頁數(shù)】：5 頁

【部分圖文】：

目標基因擴增結果

為篩選反轉錄酶最佳反應濃度,選取M-MLV反轉錄酶終濃度2、4、8 U/μL進行RT-RPA熒光檢測。結果顯示,反轉錄酶在4 U/μL濃度下反應起峰時間最短,峰值最高(圖2),因此本研究將M-MLV反轉錄酶最適反應濃度定為4 U/μL。2.3 CDV實時熒光RT-RPA特異性試驗

結果顯示,經(jīng)實時熒光RT-RPA檢測,CDV核酸樣品在反應7 min后出現(xiàn)熒光信號顯著增強,其他對照病毒核酸樣品均未檢測出熒光信號(圖3)。國標RT-PCR檢測也僅有CDV核酸樣品出現(xiàn)特異性擴增,其他對照病毒均無相應條帶(圖4)。表明所建CDV RT-RPA檢測方法特異性較好。圖4 CDV RT-PCR特異性試驗

【參考文獻】：
期刊論文
[1]重組酶聚合酶擴增技術研究進展[J]. 施奕,徐昌平,余蓓蓓,盧亦愚,梅玲玲.  病毒學報. 2020(03)
[2]快速檢測犬瘟熱病毒的實時熒光RPA方法的建立[J]. 熊煒,王艷,王楷宬,蔣靜,黃保續(xù),田楨干,林穎崢,李健.  中國獸醫(yī)科學. 2019(01)
[3]犬瘟熱的研究進展[J]. 朱慶賀,張鵬宇,王爽,陳曦,王觀悅,史同瑞.  黑龍江畜牧獸醫(yī). 2017(19)



本文編號：3147102