發(fā)布時(shí)間：2021-04-13 15:47

　　本文以不同纖維直徑的細(xì)毛羊皮膚組織中的毛囊作為實(shí)驗(yàn)材料，利用不同的提取方法，不同pH值的IPG膠條以及不同的上樣量，探索適用于細(xì)毛羊皮膚組織的雙向電泳體系，建立細(xì)毛羊皮膚組織的2-DE凝膠圖譜，挖取差異明顯的蛋白點(diǎn)進(jìn)行質(zhì)譜鑒定，鑒定肽指紋圖譜并在數(shù)據(jù)庫(kù)中比對(duì)，結(jié)合生物信息學(xué)知識(shí)分析這些差異蛋白與羊毛纖維直徑的內(nèi)在聯(lián)系，這對(duì)提高羊毛品質(zhì)具有重要的實(shí)際意義。本研究主要獲得了以下結(jié)果：1.比較TCA沉淀法，酚抽提法以及TCA/丙酮法，得出TCA/丙酮法最適合細(xì)毛羊毛囊組織總蛋白質(zhì)的提取。2.選擇用pH3-10的IPG膠條分離皮膚組織中的毛囊總蛋白，摸索蛋白點(diǎn)主要集中的范圍。實(shí)驗(yàn)中使用pH4-7，長(zhǎng)度為18cm長(zhǎng)的IPG線性膠條，這樣有助于將皮膚組織中的毛囊總蛋白在2-DE圖像上整體分布開(kāi)。比較每根膠條樣品上樣量分別為80μL、100μL、120μL，最后選擇上樣量為100μL時(shí)圖譜最清晰。上樣量為100μL，選擇18cm，pH4-7的線性IPG膠條，得到質(zhì)量較好的雙向凝膠電泳圖譜。3.對(duì)兩歲的超細(xì)型、細(xì)型細(xì)毛羊毛囊蛋白質(zhì)2-DE凝膠圖譜進(jìn)行分析，檢測(cè)出其中除差異點(diǎn)7、30、31、34、35出... 

【文章來(lái)源】：新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)新疆維吾爾自治區(qū)

【文章頁(yè)數(shù)】：72 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

三種不同提取方法處理的雙向電泳結(jié)果

30A 上樣量80μL B 上樣量100μL C 上樣量120μLA Protein-loading amount 80μL B Protein-loading amount 100μL C Protein-loading amount 120μL圖 3-2 不同上樣量對(duì)雙向電泳圖譜的影響Fig 3-2 Comparison of 2-DE map from different loaded proteins

31A B圖 3-3 不同 pH 范圍的 IPG 膠條對(duì)雙向電泳圖譜的影響Fig 3-3 Comparison of 2-DE maps with two IPG strips with different gradients

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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碩士論文
[1]6個(gè)KRT基因在中國(guó)美利奴羊（新疆型）中的遺傳多態(tài)性及其與毛性狀的關(guān)聯(lián)性分析[D]. 馬依拉·吐?tīng)栠d.新疆農(nóng)業(yè)大學(xué) 2013
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