本文關(guān)鍵詞：BMP6基因在雞股骨、脛骨生長板的表達(dá)以及其對(duì)軟骨細(xì)胞增殖分化調(diào)控的探究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：雞的體重和其生產(chǎn)性能的高低取決于骨骼發(fā)育程度,脛長的變化與整個(gè)骨架發(fā)育呈強(qiáng)正相關(guān),而且,隨著肉雞的快速生長,腿部疾病也日益增加。研究表明,家禽長骨的生長發(fā)育及成熟都是由一系列因子相互作用實(shí)現(xiàn)的。BMP6作為BMPs家族成員之一,可通過Smad信號(hào)通路在骨骼發(fā)育中起調(diào)控作用,但長骨的發(fā)生發(fā)育是否與BMP6存在相關(guān)?BMP6在調(diào)控骨骼發(fā)育過程中是否還有其他信號(hào)通路的參與?迄今尚不清楚。因此,本試驗(yàn)針對(duì)上述的兩個(gè)問題進(jìn)行探究。本試驗(yàn)采用體型上有較大差異的艾維茵與矮腳黃雞為研究對(duì)象,首先利用realtime-PCR技術(shù)檢測(cè)BMP6基因在雞不同生長時(shí)間點(diǎn)的股骨生長板和脛骨生長板兩個(gè)組織中的表達(dá)情況,探究BMP6與長骨發(fā)育的關(guān)系;其次比較兩個(gè)品種軟骨細(xì)胞的增殖能力及BMP6在不同品種軟骨細(xì)胞中的表達(dá)情況,從而探討兩個(gè)品種軟骨細(xì)胞是否存在差異,為后續(xù)試驗(yàn)提供參考：最后我們以軟骨細(xì)胞為模型,進(jìn)行不同濃度生長激素的誘導(dǎo),檢測(cè)生長激素誘導(dǎo)過程中BMP6的表達(dá)量變化,并結(jié)合siRNA干擾技術(shù),檢測(cè)干擾BMP6后,軟骨細(xì)胞增殖分化相關(guān)信號(hào)通路中關(guān)鍵基因的表達(dá)情況,探究了BMP6在軟骨生長過程中的主要作用機(jī)制。結(jié)果表明：(1)艾維茵與矮腳黃兩個(gè)品種的雞在胚胎期與初生時(shí)個(gè)體上并沒有顯著差異。且在40日齡時(shí),艾維茵公、母雞各性狀(雞重、腿重、股骨重、脛骨重、股骨長、脛骨長、股骨直徑、脛骨直徑)顯著高于矮腳黃公、母雞；70日齡時(shí),艾維茵公雞除脛骨長/脛骨直徑兩個(gè)性狀外,其他性狀顯著高于矮腳黃公雞,艾維茵母雞各性狀顯著高于矮腳黃母雞。(2)BMP6在艾維茵和矮腳黃兩個(gè)品種不同時(shí)間點(diǎn)的股骨生長板和脛骨生長板中的表達(dá)差異不顯著,說明BMP6對(duì)雞股骨和脛骨的分化發(fā)育成熟不具有決定性作用,但卻參與了軟骨生長板的分化過程。(3)BMP6在艾維茵與矮腳黃軟骨細(xì)胞培養(yǎng)第四天時(shí)的表達(dá)量均顯著增加,與兩品種軟骨細(xì)胞增殖曲線相吻合,但兩者軟骨細(xì)胞增殖能力和BMP6在兩品種軟骨細(xì)胞的表達(dá)量差異均不顯著,這表明BMP6在軟骨細(xì)胞增殖分化時(shí)高表達(dá)。(4)軟骨細(xì)胞對(duì)50ng/ul生長激素的誘導(dǎo)最敏感,且在48h時(shí)增殖明顯,BMP6的表達(dá)也顯著(P0.05)升高,表明軟骨細(xì)胞增殖時(shí),BMP6高表達(dá)。干擾BMP6后,與對(duì)照組相比,48h、72h兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)處理組中的Col Ⅱ、ColX表達(dá)量都顯著(P0.05)降低,表明軟骨細(xì)胞的增殖分化都受到了抑制。因此,我們認(rèn)為BMP6參與了軟骨細(xì)胞增殖分化過程。(5)siRNA干擾BMP6表達(dá)時(shí),軟骨細(xì)胞增殖分化受阻,IGF1R、JAK2、PKC、 PTH和PTHrP在48h時(shí)處理組細(xì)胞中的表達(dá)量與對(duì)照組差異不顯著,而在72h處理組細(xì)胞中的表達(dá)量顯著低于對(duì)照組(P0.05)；且Ihh在48h、72h兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)處理組中的表達(dá)與對(duì)照組相比都顯著(P0.05)降低。上述結(jié)果說明IGF1R、JAK2、PKC、PTH、Ihh、PTHrP這幾個(gè)基因參與了BMP6對(duì)軟骨細(xì)胞的增殖分化調(diào)控。綜上所述,BMP6主要通過調(diào)控軟骨細(xì)胞增殖分化參與雞骨骼早期的發(fā)生發(fā)育,且BMP6的調(diào)控可能與IGF1R、JAK2、PKC、PTH、Ihh、PTHrP這幾個(gè)基因有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：艾維茵雞 矮腳黃雞 軟骨細(xì)胞 BMP6基因 增殖分化
【學(xué)位授予單位】：四川農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：S831.2
【目錄】：

• 摘要5-7
• ABSTRACT7-9
• 英文縮寫詞(ABBREVIATIONS)9-12
• 1 文獻(xiàn)綜述12-21
• 引言12
• 1.1 骨的結(jié)構(gòu)及其發(fā)生12-14
• 1.1.1 膜內(nèi)成骨13
• 1.1.2 軟骨內(nèi)成骨13-14
• 1.2 生長板結(jié)構(gòu)14
• 1.3 生長板軟骨發(fā)育的調(diào)節(jié)14-21
• 1.3.1 激素類對(duì)生長板軟骨發(fā)育的調(diào)控15-17
• 1.3.2 生長因子類對(duì)生長板軟骨發(fā)育的調(diào)控17-21
• 1.4 本研究的目的意義21
• 2 材料與方法21-30
• 2.1 試驗(yàn)動(dòng)物21-22
• 2.2 試驗(yàn)試劑與耗材22-23
• 2.2.1 主要試劑及試劑盒22
• 2.2.2 常用試劑的配制22-23
• 2.2.3 主要儀器設(shè)備23
• 2.2.4 主要應(yīng)用的生物學(xué)軟件23
• 2.3 試驗(yàn)方法23-30
• 2.3.1 軟骨組織樣品的采集23-24
• 2.3.2 細(xì)胞試驗(yàn)24-27
• 2.3.3 熒光定量PCR27-30
• 2.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析30
• 3 結(jié)果與分析30-41
• 3.1 RNA提取效果的檢測(cè)30-31
• 3.2 RT-PCR引物特異性檢測(cè)31-33
• 3.3 機(jī)體試驗(yàn)結(jié)果33-35
• 3.3.1 兩個(gè)品種個(gè)體生長差異33-35
• 3.4 細(xì)胞試驗(yàn)結(jié)果35-41
• 3.4.1 軟骨細(xì)胞鑒定結(jié)果35-36
• 3.4.2 兩個(gè)品種雞胚軟骨細(xì)胞增殖比較及BMP6表達(dá)情況36-37
• 3.4.3 生長激素誘導(dǎo)雞胚軟骨細(xì)胞后BMP6的表達(dá)37-38
• 3.4.4 BMP6基因表達(dá)受干擾后細(xì)胞中相關(guān)基因的表達(dá)38-41
• 4 討論41-46
• 4.1 BMP6基因在艾維茵與矮腳黃股骨生長板、脛骨生長板中的表達(dá)情況41-42
• 4.2 BMP6基因在不同品種雞軟骨細(xì)胞中的表達(dá)42-43
• 4.3 BMP6基因?qū)浌羌?xì)胞增殖分化的調(diào)控43-44
• 4.4 BMP6基因?qū)浌羌?xì)胞代謝相關(guān)基因影響44-46
• 5 結(jié)論46-48
• 參考文獻(xiàn)48-54
• 致謝54-55
• 攻讀碩士期間參加的科研項(xiàng)目和發(fā)表文章情況55
• 1. 參加的科研項(xiàng)目55
• 2. 發(fā)表的論文55

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 李振興;陳傳俊;;雌激素降低對(duì)大鼠髁突軟骨ERα、ERβ、OPG和RANKL表達(dá)的影響[J];上�？谇会t(yī)學(xué);2015年04期

2 楊濤;江波;徐鵬;林剛;;甲狀腺素誘導(dǎo)人臍血間充質(zhì)干細(xì)胞向軟骨細(xì)胞分化中的作用[J];中國組織工程研究;2015年01期

3 侯寧;楊冠;范雄偉;吳秀山;楊曉;;肥大軟骨細(xì)胞特異性表達(dá)Cre重組酶轉(zhuǎn)基因小鼠的建立[J];遺傳;2009年01期

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 孫冬梅;決定骨骼發(fā)育的轉(zhuǎn)錄因子的轉(zhuǎn)錄調(diào)控機(jī)制的研究[D];東北師范大學(xué);2009年

  本文關(guān)鍵詞：BMP6基因在雞股骨、脛骨生長板的表達(dá)以及其對(duì)軟骨細(xì)胞增殖分化調(diào)控的探究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：312281