口蹄疫（Foot and mouth disease,FMD）是由口蹄疫病毒（Foot and mouth disease virus,FMDV）引起的偶蹄動(dòng)物的一種人獸共患傳染病，可以導(dǎo)致被感染的家畜生產(chǎn)機(jī)能嚴(yán)重下降，相關(guān)畜產(chǎn)品品質(zhì)不佳，并且嚴(yán)重影響畜產(chǎn)品及其相關(guān)產(chǎn)品的國(guó)際貿(mào)易，給國(guó)民經(jīng)濟(jì)帶來(lái)巨大沖擊。目前，對(duì)口蹄疫的防治主要是以滅活疫苗為主，但是隨著防疫標(biāo)準(zhǔn)的不斷提高，以及出于生物安全的考慮，傳統(tǒng)疫苗暴露出了一系列的問(wèn)題。因此，研制新型的基因工程疫苗顯得異常重要。為鑒定O型FMDV衣殼抗原的耐酸穩(wěn)定性相關(guān)位點(diǎn)，通過(guò)改變相關(guān)位點(diǎn)以提高衣殼抗原在家蠶桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)（Bombyx mori baculovirorus expression system）中的表達(dá)量，最終研制基因亞單位疫苗。本研究利用PH6.0的PBS對(duì)FMDV O/ON/CHA/株進(jìn)行酸化處理，經(jīng)Tris（PH7.6）中和后，通過(guò)中性紅蝕斑克隆技術(shù)得到兩株耐酸性單克隆毒株S-A和S-B。將二者的P1基因與未酸化處理的原毒的P1基因進(jìn)行序列比對(duì)，在編碼衣殼蛋白的P1基因上發(fā)現(xiàn)4個(gè)突變位點(diǎn)，其中VP1的N17D和VP2的D... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京市

【文章頁(yè)數(shù)】：51 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

型FMDV基因組的分端擴(kuò)增Fig.1AmplificationofOtypeFMDVgenomebyPCRM1:DL2000marker；1:392bp的片段N1；2:687bp的片段N2；3:3534bp的片段N3；4:3852bp的片段N4；M2：λ-EcoT14DNAMarker

圖 2 兩株 FMDV 感染 BHK-21 細(xì)胞Fig 2The BHK-21 cell infected by S-A and S-BA:陰性對(duì)照；B：S-A 株 FMDV 感染 BHK-21；C :S-B 株 FMDV 感染 BHK-21A:negative control；B:The BHK-21 cell infected by of FMDV S-A strain；C:The BHK-21 cell infected byof FMDV S-B strain2.3.3 酸化毒的 P1 片段的擴(kuò)增根據(jù)應(yīng)經(jīng)測(cè)通的病毒基因組并結(jié)合 NCBI 查詢結(jié)果，準(zhǔn)確找出 P1 基因的起始點(diǎn)及終止點(diǎn)，用 DNAMAN 軟件設(shè)計(jì)的一對(duì)引物擴(kuò)增兩株毒的 P1 基因，1% 的瓊脂糖凝膠檢測(cè)顯示，兩株毒都可以準(zhǔn)確的檢測(cè)到與目的片段大小相當(dāng)，長(zhǎng) 2208bp 的片段，將 PCR 回收產(chǎn)物分別連接到pMD18-T 上的陽(yáng)性質(zhì)粒送測(cè)序公司測(cè)序。

染 BHK-21 細(xì)胞 cell infected by S-A and S-BS-A 株 FMDV 感染 BHK-21；C :S-B 株 FMDV 感染 BHK-21rol；B:The BHK-21 cell infected by of FMDV S-A strain；C:The BHK-21ain的 P1 片段的擴(kuò)增通的病毒基因組并結(jié)合 NCBI 查詢結(jié)果，準(zhǔn)確找出 P1 基因的起軟件設(shè)計(jì)的一對(duì)引物擴(kuò)增兩株毒的 P1 基因，1% 的瓊脂糖凝膠檢檢測(cè)到與目的片段大小相當(dāng)，長(zhǎng) 2208bp 的片段，將 PCR 回收陽(yáng)性質(zhì)粒送測(cè)序公司測(cè)序。

【參考文獻(xiàn)】：
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本文編號(hào)：3122017