發(fā)布時間：2021-03-31 23:13

　　犬細小病毒病（canine parvovirus disease, CPVD）是一種由犬細小病毒（canine parvovirus,CPV）感染引起的以出血性腸炎或非化膿性心肌炎為主要特征的病毒性傳染病,該病傳播速度快,各種年齡和性別犬均可感染,幼犬的死亡率高達70%,成年犬隱形帶毒并持續(xù)向外界排毒的現(xiàn)象普遍存在,現(xiàn)已成為危害我國養(yǎng)犬業(yè)健康發(fā)展的重要傳染病之一,因此,建立快速、準確的診斷方法對CPVD的防治至關(guān)重要。本研究旨在制備抗CPV單克隆抗體,建立CPVD雙抗體夾心ELISA和膠體金免疫層析試紙條檢測方法,為CPVD的快速檢測和診斷提供幫助。本文內(nèi)容包括以下四個部分：試驗一：犬細小病毒的分離及其VP2基因分子特征分析從犬細小病毒病免疫預(yù)防失敗犬體內(nèi)分離到一株犬細小病毒（CPV）,命名為Js12。該病毒可凝集豬的紅細胞,對乙醚不敏感,pH3.0不能滅活病毒,pHH10.0可使病毒失去感染性,56℃作用60min病毒仍有活性,80℃作用30min可使病毒失活。序列分析,JS12屬于CPV-2a亞型,VP2基因全長1755nt,共編碼584aa,與國外CPV毒株VP2基因的核苷酸序列... 

【文章來源】：南京農(nóng)業(yè)大學(xué)江蘇省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：88 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略語
第一篇 文獻綜述 犬細小病毒病研究進展
    1 犬細小病毒病概況
        1.1 起源和發(fā)展
        1.2 感染宿主范圍
        1.3 流行現(xiàn)狀
        1.4 臨床癥狀
    2 犬細小病毒病的病原特性
        2.1 形態(tài)特點和生物學(xué)特性
        2.2 培養(yǎng)特性
        2.3 基因組結(jié)構(gòu)與編碼蛋白
        2.4 抗原性
    3 犬細小病毒病的診斷
        3.1 臨床診斷
        3.2 病毒分離
        3.3 電鏡檢查
        3.4 免疫學(xué)檢測方法
        3.5 分子生物學(xué)檢測方法
    4 犬細小病毒的防控
        4.1 弱毒疫苗
        4.2 滅活疫苗
        4.3 基因工程亞單位疫苗
        4.4 核酸疫苗
    5 犬細小病毒病的治療
    參考文獻
第二篇 試驗研究
    第一章 犬細小病毒的分離及其VP2基因分子特征分析
        摘要
        1 材料和方法
            1.1 細胞、毒株和動物
            1.2 主要試劑
            1.3 病料采集與處理
            1.4 病毒分離與培養(yǎng)
            1.5 病毒滴度的測定
            1.6 動物發(fā)病試驗
            1.7 病毒生物學(xué)特性分析
            1.8 VP2基因的擴增
            1.9 VP2基因的克隆
            1.10 VP2基因的序列分析
            1.11 VP2蛋白的立體結(jié)構(gòu)分析
            1.12 VP2蛋白的誘導(dǎo)表達
            1.13 重組VP2蛋白的抗原性分析
        2 結(jié)果
            2.1 病毒分離與培養(yǎng)
            2.2 病毒滴度的測定
            2.3 動物發(fā)病試驗
            2.4 病毒生物學(xué)特性分析
            2.5 VP2基因的擴增與克隆
            2.6 VP2基因的序列分析
            2.7 VP2蛋白的立體結(jié)構(gòu)分析
            2.8 VP2蛋白的誘導(dǎo)表達
            2.9 重組VP2蛋白的抗原性分析
        3 討論
        參考文獻
        Abstract
    第二章 分泌犬細小病毒單克隆抗體雜交瘤細胞株的建立
        摘要
        1 材料與方法
            1.1 細胞、病毒和動物
            1.2 主要試劑
            1.3 CPV抗原的純化
            1.4 動物免疫
            1.5 細胞融合
            1.6 間接ELISA檢測方法的建立
            1.7 雜交瘤細胞株的篩選
            1.8 陽性雜交瘤細胞株的亞克隆
            1.9 單克隆抗體腹水的制備
            1.10 單克隆抗體特異性鑒定
            1.11 單克隆抗體效價測定
            1.12 單克隆抗體亞類鑒定
            1.13 單克隆抗體抗原識別位點差異性分析
            1.14 單克隆抗體中和活性測定
            1.15 雜交瘤細胞株穩(wěn)定性測定
        2 結(jié)果
            2.1 CPV抗原的純化
            2.2 間接ELISA檢測方法的建立
            2.3 單克隆抗體特異性鑒定
            2.4 單克隆抗體效價測定
            2.5 單克隆抗體亞類鑒定
            2.6 單克隆抗體抗原識別位點差異性分析
            2.7 單克隆抗體中和活性測定
            2.8 雜交瘤細胞株穩(wěn)定性測定
        3 討論
        參考文獻
        Abstract
    第三章 犬細小病毒單克隆抗體夾心ELISA檢測方法的建立
        摘要
        1 材料與方法
            1.1 病毒、抗體與動物
            1.2 主要試劑
            1.3 單克隆抗體腹水的制備
            1.4 腹水的純化
            1.5 單克隆抗體的標記
            1.6 單克隆抗體配對試驗
            1.7 捕獲抗體和酶標抗體工作濃度的優(yōu)化
            1.8 夾心ELISA試驗條件的優(yōu)化
            1.9 夾心ELISA判定標準的確定
            1.10 特異性檢驗
            1.11 敏感性檢驗
            1.12 重復(fù)性檢驗
            1.13 臨床樣品檢測
        2 材料與方法
            2.1 單克隆抗體配對試驗
            2.2 捕獲抗體和酶標抗體工作濃度的優(yōu)化
            2.3 夾心ELISA試驗條件的優(yōu)化
            2.4 夾心ELISA判定標準的確定
            2.5 特異性檢驗
            2.6 敏感性檢驗
            2.7 重復(fù)性檢驗
            2.8 臨床樣品檢測
        3 討論
        參考文獻
        Abstract
    第四章 犬細小病毒單克隆抗體膠體金免疫層析檢測試紙條的制備
        摘要
        1 材料和方法
            1.1 單抗與病料
            1.2 主要試劑及耗材
            1.3 玻璃器皿的處理
            1.4 單克隆抗體純化
            1.5 膠體金溶液的制備
            1.6 膠體金溶液的鑒定
            1.7 膠體金與抗體的標記
            1.8 試紙條的優(yōu)化
            1.9 試紙條的組裝
            1.10 試紙條特性鑒定
            1.11 臨床樣品檢測
        2 結(jié)果
            2.1 膠體金溶液的鑒定
            2.2 膠體金與抗體的標記
            2.3 試紙條的優(yōu)化
            2.4 試紙條特性鑒定
            2.5 臨床樣品檢測
        3 討論
        參考文獻
        Abstact
全文總結(jié)
附錄：常用試劑的配制
致謝
攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文



本文編號：3112240